Erfahrungen mit UPLC-MS/MS Kopplung in der klinisch-toxikologischen Analytik Michael Böttcher MVZ für Mikrobiologie, Labordiagnostik & Hygiene, Dessau,

Präsentation zum Thema: "Erfahrungen mit UPLC-MS/MS Kopplung in der klinisch-toxikologischen Analytik Michael Böttcher MVZ für Mikrobiologie, Labordiagnostik & Hygiene, Dessau,"—  Präsentation transkript:

1 Erfahrungen mit UPLC-MS/MS Kopplung in der klinisch-toxikologischen Analytik Michael Böttcher MVZ für Mikrobiologie, Labordiagnostik & Hygiene, Dessau, Germany ®

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5 10 min 1980er Jahre bis heute 3,5 - 5 µm sphärisch, mikroporös 1.500-4.000 psi (110-280 bar) 80.000 - 115.000 Böden/Meter Ende der 1970er Jahre 10 µm irregulär, mikroporös 1.000-2.500 psi (70-180 bar) 40.000 Böden/Meter 10 min Anfang der 1970er Jahre 40 µm pellikulär, nicht-porös 100-500 psi (7-40 bar) 5.000 Böden/Meter 10 min Warum UPLC? Zunahme der chromatographischen Auflösung

6 H = HETP (Height Equivalent to Theoretical Plate) H = “Bodenhöhe” [µm] Die zur Erreichung eines Gleichgewichtes zw. mobiler und stationärer Phase benötigte Trennstrecke. H möglichst klein, so dass mehr "Böden in die Säule passen". Die chromatographische Auflösung Rs ist proportional zur Quadratwurzel von N = Bodenzahl (+Selektivität+Retentivität) N= Bodenzahl (aus der Destillationstheorie) 5 Böden 10 Böden (H größer) (H kleiner) "dicker" "dünner" L : Säulenlänge Plate HETP

7 A-Term B-Term C-Term u H = a(dp) + b + c(dp) 2 u A-Term (Eddy Diffusion) – Streudiffusion, abhängig von der Partikelgröße – unabhängig von der Geschwindigkeit B-Term (Molekulare Diffusion, axial) – umgekehrt proportional zur Geschwindigkeit C-Term (Massentransferkinetik) – proportional zur Geschwindigkeit – proportional zum Quadrat der Partikelgröße – beschreibt Wechselwirkung der Analyten an stationärer Phase Van Deemter Gleichung Lineare Geschwindigkeit [mm/sec]

8 A Term (Partikelgröße und “Packweise”) Height Equivalent to Theoretical Plate Lineare Geschwindigkeit [mm/sec] u HETP minimal => Optimale Bodenzahl HETP Böden H C Term (Massentransfer) B-Term (Axial Diffusion) A-Term B-Term C-Term H = a(dp) + b + c(dp) 2 u u C-Term B-Term Van Deemter Kurve

9 Voraussetzungen für UPLC mit MS-Kopplung -- geringe Totvolumina -- Pumpe für hohe Drücke -- schneller Detektor für schnelle Peaks u. Multi-MRM: - kurze Dwell-Time ohne Intensitätseinbußen - kurzer InterChannel delay aber kein „Cross-Talk“ - kurzer InterScan delay

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13 A B CD Elimination of EtG and EtS

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15 EtG and EtS with LC/MS-MS

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17 Ion suppression experiment: EtG infusion, urine injected EtSEtG

18 EtSEtG Ion suppression experiment: EtG infusion, serum injected

19 UPLC-MS/MS serum calibration EtG

20 UPLC-MS/MS serum calibration EtS

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34 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!