Molekulare Zellbiologie Proteinsynthese I. 24.11.2018 Sebők Ágnes

mRNA-Prozessierung I. Cap-formation II. Polyadenierung III. RNA-Spleißen 24.11.2018 Sebők Ágnes

Struktur der pre-mRNA und mRNA Intron – Exon 5‘ und 3‘-nichtkodierender Bereich Cap und poly-A-Schwanz 24.11.2018 Sebők Ágnes

RNA-Spleißen Introns entfernen, und Exons miteinander verbinden 5‘ und 3‘ Spleiße-Signalsequenzen snRNP: Rybosym 24.11.2018 Sebők Ágnes

RNA-Spleißmechanismus 5‘ - U1 ; 3‘ – U2 U4/U6 und U5 Schnitt an der 5‘-Spleisstelle Lariatbildung (Schlaufe) Schnitt an der 3‘-Spleisstelle Verbindung der zwei Exonsequenzen 24.11.2018 Sebők Ágnes

Spleißung-Krakheiten SLE (systemische Lupus erythematodes) Autoimmunerkrankung Anti-snRNP-Antikörper Thalassemia Anaemia: a- und b-Globin-Synthese ist ruduziert Mutation der Spleisstelle 24.11.2018 Sebők Ágnes

RNAs in Proteinsynthese Proteinsynthese I. RNAs in Proteinsynthese 24.11.2018 Sebők Ágnes

RNA mRNA (messenger) tRNA (transfer) rRNA (ribosamal) Matrize der Proteinsynthese tRNA (transfer) Adapter rRNA (ribosamal) Ribosomen 24.11.2018 Sebők Ágnes

tRNA Primärstruktur 70-80 AS, 4S ungewöhnliche Basen (T, Ψ, D) Synthese: RNA Pol. III, Nucleoplasma Primärstruktur 70-80 AS, 4S ungewöhnliche Basen (T, Ψ, D) Sekundärstruktur Komplementare Basenpaarung Kleeblatt Tertiärstruktur L-förmig 24.11.2018 Sebők Ágnes

tRNA - Adapter Sekundärstruktur Kleeblatt TΨCG-Schleife - Enzym D-Schleife - Ribosome Anticodon-Schleife - mRNA Akzeptorarm (3’-Ende) - AS 24.11.2018 Sebők Ágnes

Aktivierung der Aminisäure AS + ATP ────> Amonoacyl-AMP +2 Pi Aminoacyl-tRNA-Synthetase Aminoacyl-AMP + tRNA ────> Amonoacyl-tRNA + AMP 24.11.2018 Sebők Ágnes

Struktur der Ribosomen Prokaryotisch: 70S 50S: 23S, 5S rRNA 30S: 16S rRNA Eukaryontisch: 80S 60S: 28S, 5.8, 5S rRNA 40S: 16S rRNA 24.11.2018 Sebők Ágnes

rRNA - Funktion Bindung der tRNA Bindung der Ribosome-Einheiten Bindung der mRNA (bakteriell) Peptidyltransferase-Aktivität - Rybosym 24.11.2018 Sebők Ágnes

In vitro Proteinsynthese Zellfreies System (Nierenberg) Zellextrakt: Ribosomen, tRNA, Proteinfaktoren ATP, GTP mRNA 20 AS (1 radioaktiv markiert) Detektion: Filterpercipitierung, (PAGE) 24.11.2018 Sebők Ágnes

Eigenschaften des genetischen Codes Triplett Redundant (degeneriert) (1 AS – mehrere Codons + 3 STOP-Codons) Wobble (3. Pos.) Eindeutig (1 Codon ─> 1 AS) Kontinuierlich (lückenlos, nicht überlappend) Universell (Mitochonrien!) 24.11.2018 Sebők Ágnes

ORF Open reding frame – Offener Leseraster Initiationscodon Stopcodon 24.11.2018 Sebők Ágnes

Mechanismus der Proteinsynthese Initiation Elongation Termination 24.11.2018 Sebők Ágnes

Initiation Strartcodon – fMet-tRNA Shine-Dalgarno-Sequenz IFs (Initiationsfaktoren) + GTP 30S ─> 70S Initiationscomplex 24.11.2018 Sebők Ágnes

Elongation AS-tRNA- Bindung Entstehung der Peptidbindung Translokation EF-Tu-GTP A-Stelle Entstehung der Peptidbindung Peptydyltransferase (28S rRNA-Rybosim) Translokation EF-G-GTP 24.11.2018 Sebők Ágnes

Termination Stoppcodon Releasing factors (Freisetzungsfaktoren) 24.11.2018 Sebők Ágnes

Eigenschaften der Proteinsynthese 5 ‘ ─> 3‘ N ─> C Polysomen 4 energiereiche Phosphatbindungen/AS ATP ─> AMP (AS Aktiverung) 2 GTP ─> GNP (Elongation) 24.11.2018 Sebők Ágnes

Antibiotika – Inhibitoren der Proteinsynthese Chloramphenicol – Peptidyltransferase Erythromycin – Translocation Tetracyclin – AS-tRNA-Bindung Streptomycin – 30 Untereinheit Puromycin – frühe Termination 24.11.2018 Sebők Ágnes