Wie kann ein Vektor optimiert werden?

Präsentation zum Thema: "Wie kann ein Vektor optimiert werden?"—  Präsentation transkript:

1 Wie kann ein Vektor optimiert werden?
Rekombinante Proteinsynthese in Prokaryoten Clara Morweiser

2 Übersicht rekombinante Synthese
[Abb.1]

3 Zielgen Ribosomale Bindungsstelle Stabilität der mRNS
Erhöhung A und T Anteil um RBS Abstand von Start-Codon CA-Multimere zwischen RBS und Start-Codon [Abb.2] Regulatorische Proteine erhöhen durch Anlagerung an mRNA die Halbweärtszeit RNAse defiziente Stämme sind schwierig in der Anzucht Stabilität der mRNS Bildung von Haarnadelstrukturen am Ende Regulatorische Proteine RNAse defiziente Stämme

4 Zielgen Stopp-Codon Start-Codon Tetranukleotid UAAU
„ribosome skipping“ [Abb.2] Regulatorische Proteine erhöhen durch Anlagerung an mRNA die Halbweärtszeit RNAse defiziente Stämme sind schwierig in der Anzucht Start-Codon AUG

5 Codon-Präferenz 53% 3% [Abb.3]

6 Codon-Präferenz (2) [Abb.4] [Abb.5]

7 Vielen Dank für eure Aufmerksamkeit!
Zusammenfassend… Vielen Dank für eure Aufmerksamkeit! [Abb.6] Zielgen Ribosomalen Bindungsstelle Start/Stopp-Cod Codon-Präferenz Einsatz veränderter Organismen mRNA Stabilität

8 Abbildungsverzeichnis
Science Bridge e.V G. Hannig, S. C. Makrides. Strategies for optimizing heterologous protein expression in Escherichia coli. Trends in biotechnology 16.2,1998, S neurobiologie-zytologie-evolution-oekologie/Screen_shot_ _at_ png N. A. Burgess-Brown et al. Codon optimization can improve expression of human genes in Escherichia coli: A multi-gene study. Protein expression and purification, , S [Fig. 2 ] N. A. Burgess-Brown et al. Codon optimization can improve expression of human genes in Escherichia coli: A multi-gene study. Protein expression and purification, , S [Fig. 4 ] age/9df78eab33525d08d6e5fb8d27136e95/e/c/ecoli-zoom.jpg

9 Literatur K.H. Friehs, Maßnahmen zur Verbesserung der Produktion von rekombinanten Proteinen und Plasmid DNS. Bielefeld, 1999 A. Garten, Vorlesung: Proteinexpression (VL Proteinbiochemie). Leipzig 2019 N. A. Burgess-Brown et al. Codon optimization can improve expression of human genes in Escherichia coli: A multi-gene study. Protein expression and purification, , S G. Hannig, S. C. Makrides. Strategies for optimizing heterologous protein expression in Escherichia coli. Trends in biotechnology 16.2,1998, S J. Martin-Farmer, G.R. Janssen. A downstream CA repeat sequence increases translation from leadered and unleadered mRNA in Escherichia coli. Molecular microbiology 31.4, 1999, S