U. Fiedler, R. Kranz, A. Manseck, M. Wirth

Präsentation zum Thema: "U. Fiedler, R. Kranz, A. Manseck, M. Wirth"—  Präsentation transkript:

1 Quantifizierung von Tumorzellen in regionären Lymphknoten von Patienten mit Prostatakarzinom
U. Fiedler, R. Kranz, A. Manseck, M. Wirth Klinik und Poliklinik für Urologie Universitätsklinikum der TU-Dresden

2 Metastasierung beim PCa
Ausbreitung Lymphbahnen peripheres Blut Ansiedlung Lymphknoten 69 % Knochen 68% Lunge 48% Leber 33% Eble 1993

3 Diagnose der Lymphknoten- Metastasierung
Prä-operativ: Tumormarkerbestimmung (PSA) Bildgebende Verfahren (MRT, PET) Post-operativ: Histopathologische Begutachtung Immunhistochemie

4 Molekularbiologischer Nach-weis der Lymphknoten-Metastasierung
Nachweis und Quantifizierung prostataspezi- fischer Transkripte Prostata spezifisches Antigen (PSA) Transkripte: PSA mRNA Prostata spezifisches Membranantigen (PSM) Transkripte: PSM mRNA PSM‘ mRNA PSM‘‘ mRNA u. a.

5 Nachweis prostataspezifischer Transkripte mittels RT-PCR
Aufschluß des Lymphknoten-Gewebes AAA AAA mRNA AAA Isolierung der Gesamt-RNA DNase-Behandlung Umschreibung in cDNA Transkript-spezifische PCR NNNNNN cDNA AAA PCR

6 Ergebnisse der qualitativen
RT-PCR- Analysen n PSA PSM PSM‘+ PCa PCa/N PCa/N N+: histologisch positive Lymphknoten N-: keine Metastasierung festgestellt

7 Entwicklung der quantitativen
RT-PCR-Analytik Bezugsgröße: GAPDH-Transkripte Standards: Plasmid-DNA mit klonierten PCR Produkten bekannter Konzentration für GAPDH, PSA, PSM, PSM‘ Analysen: Zweischritt-RT-PCR, Hybridisierungsproben, externe Standards Auswertung: Bestimmung einer durchschnittlichen GAPDH- Transkriptmenge pro µg Gesamt-RNA Angabe der prostataspezifischen Trans- kriptmengen pro µg Gesamt-RNA bei einheitlicher GAPDH-Menge

8 Ergebnisse der PSA-RT-PCR Analysen am Light-Cycler
n PSA TK PCa/N / ,5x10E6 vb/PCa/N / ,2x10E4 PCa/N / ,4x10E5 N+: histologisch positive Lymphknoten N-: keine Metastasierung festgestellt vb: hormonell behandelt TK: Transkriptmenge/µg RNA bei einheitlichem GAPDH

9 Ergebnisse der PSM-RT-PCR Analysen am Light-Cycler
n PSM TK PCa/N / ,1x10E6 vb/PCa/N / ,0x10E6 PCa/N / ,6x10E6 N+: histologisch positive Lymphknoten N-: keine Metastasierung festgestellt vb: hormonell behandelt TK: duchschnittliche Transkriptmenge/µg RNA bei einheitlichem GAPDH

10 Ergebnisse der PSM‘-RT-PCR Analysen am Light-Cycler
n PSM‘ TK PCa/N / ,5x10E6 vb/PCa/N / ,0x10E5 PCa/N / ,9x10E7 N+: histologisch positive Lymphknoten N-: keine Metastasierung festgestellt vb: hormonell behandelt TK: Transkriptmenge/µg RNA bei einheitlichem GAPDH

11 Zusammenfassung Light-Cycler-Analysen ermöglichen:
- spezifische Detektion von Transkripten - sensitive Detektion - Bestimmung der vorhandenen Zellmengen Bestimmung von Schwellwerten für die einzelnen Transkripte im follow up Einfluß auf die Überwachung/Therapie