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DNA-Fingerprint1 Nachweis der PCR- Produkte durch Agarose- Gelelektrophorese.

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Präsentation zum Thema: "DNA-Fingerprint1 Nachweis der PCR- Produkte durch Agarose- Gelelektrophorese."—  Präsentation transkript:

1 DNA-Fingerprint1 Nachweis der PCR- Produkte durch Agarose- Gelelektrophorese

2 DNA-Fingerprint2 1. Vorbereiten der Gelkammer

3 DNA-Fingerprint3 1. Vorbereiten der Gelkammer 1.1 1g Agarose werden mit 33 ml TAE-Puffer in einen 100 ml Erlenmeyerkolben gegeben! 1.2 Kochen Sie das Gemisch in der Mikrowelle kurz auf, schwenken Sie um und kochen Sie erneut kurz auf! 1.3Lassen Sie die Agarose-Lösung auf 55°C abkühlen (Handrückentest) und gießen Sie das Gel!

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5 5 1.4Entfernen Sie nach dem Erstarren des Gels die Metallkeile! 1.5Überschichten Sie das Gel mit 270 ml TAE-Puffer (1 fach)! 1.6Ziehen Sie den Kamm! 1. Preparation of the Gel Chamber

6 DNA-Fingerprint6 2. Probenvorbereitung für Agarose-Gelelektrophorese

7 DNA-Fingerprint7 2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese 2.1Entnehmen Sie Ihre 6 PCR-Tubes aus dem Thermocycler! 2.2Setzen Sie Ihre PCR-Tubes in die Tube- adapter!

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9 9 2.3Pipettieren Sie 5 µl Orange G Loading dye (LD) in jedes der 6 PCR-Tubes und durchmischen Sie durch Auf- und Abpipettieren! 2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese

10 DNA-Fingerprint10 3. Befüllen der Geltaschen

11 DNA-Fingerprint11 3. Befüllen der Geltaschen 3.1Befüllen Sie die Geltaschen von links nach rechts mit: - 12 µl Molekulargewichts-Standard (MWR) - 20 µl –GVL Kontrolle mit PMM (1) - 20 µl –GVL Kontrolle mit GMM (2) - 20 µl LM-Probe (T) mit PMM (3) - 20 µl LM-Probe (T) mit GMM (4) - 20 µl +GVL-DNA mit PMM (5) - 20 µl +GVL-DNA mit GMM (6)

12 DNA-Fingerprint12 4. Durchführen der Gelelektrophorese

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14 DNA-Fingerprint14 4. Durchführen der Gelelektrophorese 4.1 Verschließen Sie die Gelkammer und starten Sie die Elektrophorese bei 100 V! 4.2 Beenden Sie die Elektrophorese kurz bevor der rote Farbstoff Orange G das Gelende erreicht hat!

15 DNA-Fingerprint15 5. Färben des Gels

16 DNA-Fingerprint16 5. Färben des Gels 5.1Öffnen Sie die Gelkammer und dekantieren Sie den TAE-Puffer ab! (Wiederverwendung des Puffers ist möglich!) 5.2Überführen Sie das Gel in eine Färbe- schale und überschichten Sie es 5 Minuten mit 70 ml Färbelösung (100 fach)!

17 DNA-Fingerprint17 5.3Gießen Sie die Färbelösung ab und entfärben Sie das Gel 25 Minuten in der Färbeschale in lauwarmem Wasser! 5. Making DNA Fragments Visible

18 DNA-Fingerprint18 6. Gelauswertung

19 DNA-Fingerprint19 6. Evaluation 6.1 Identifizieren Sie die DNA-Banden im Gel anhand des Molekulargewichts- Standards mit: 100 bp, 200 bp, 500 bp, 700 bp, 1000 bp!

20 DNA-Fingerprint20 6.2Enthält Ihre untersuchte Lebensmittelprobe (T) einen Anteil einer gentechnischen Veränderung? 6.3Vergleichen Sie Ihre Ergebnisse mit den DNA-Banden nach der PAGE! 6. Evaluation


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