Zytogenetik der Non-Hodgkin-Lymphome des Kindes- und Jugendalters

Präsentation zum Thema: "Zytogenetik der Non-Hodgkin-Lymphome des Kindes- und Jugendalters"—  Präsentation transkript:

1 Zytogenetik der Non-Hodgkin-Lymphome des Kindes- und Jugendalters
Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

2 Chromosomale Aberrationen bei ALL
pro-B common prä-B B-ALL T-ALL AUL mixed Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

3 Chromosomale Aberrationen bei B-NHL/B-ALL
t(8;22)(q24;q11) t(2;8)(p11;q24) Chromosomale Aberrationen bei B-NHL/B-ALL t(8;14)(q24;q32) c-MYC  IgH, Ig, Ig Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

4 Chromosomale Aberrationen bei ALCL
2 5 Chromosomale Aberrationen bei ALCL Bruchpunkte der Partnerchromosomen bei varianten 2p23-Translokationen t(2;5)(p23;q35) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

5 Aberrationen in T-Zell-Lymphomen
t(1;14)(p32;q11) 14q11  TCRa Partnergene TAL1  1p32 HOX11  10q24 RHOM2  11p13 TCL1  14q32 MYC  8q24 LMO1  11p15 t(10;14)(q24;q11) t(11;14)(p13;q11) inv(14)(q11q32) Weitere Translokationen t(8;14)(q24;q11) t(11;14)(p15;q11) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

6 Aberrationen in T-Zell-Lymphomen
7q35  TCRß Aberration Partnergen t(1;7)(p34;q35) LCK t(7;10)(q35;q24) HOX11 t(7;19)(q35;p13) LYL1 Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

7 Genetische Diagnostik
klassische Zytogenetik G-, R-, Q-, C-Bandenfärbung Molekulare Zytogenetik Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) Chromosomen-Painting (WCP) Zentromer-Sonden YAC and Cosmid-Sonden 24-Farben-FISH (SKY/M-FISH) Comparative genomic hybridization (CGH) CGH auf Chromosomen Array CGH Molekulargenetik Long distance (LD-) PCR reverse transcriptase (RT-) PCR real time quantitative (RQ-) RT-PCR Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

8 Voraussetzung: genügend vitale Zellen
Zytogenetik Versand Zellgewinnung 24 Std.-Kultur Zugabe von Colchizin Herstellung der Präparate Hypotone Phase Fixieren in Alkohol:Eisessig 3:1 Auftropfen Färbung G-Banden-Färbung Auswertung Computergesteuerte Bildverarbeitung Voraussetzung: genügend vitale Zellen Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

9 Nachweis von 8q24-Aberrationen mit break-apart-Sonde
MYC normal MYC-Translokation Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

10 24-Farben-FISH 43~45,X,-Y,der(1)t(1;5)(q10;?p10),+der(1)t(1;5)(q10;?p10),del(6)(q15),der(8)t(8;13)(p?; q?)t(8;22)(q24;q11),-10,-15,del(16)(q13),der(22)t(8;22)(q24;q11),+mar,inc[cp4]/43~45, idem,-der(22)t(8;22)(q24;q11),+mar,inc[cp3]/46,XY[2] Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

11 Comparative Genomic Hybridization (CGH)
Tumor-DNA Referenz-DNA DNA-Verlust zB Monosomie, Deletion DNA-Zugewinn zB Trisomie, Duplikation Nachweis der Aberration durch Fluoreszenz-Markierung normaler Chromosomen Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

12 Polymerase Kettenreaktion Polymerase Chain Reaction (PCR)
Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

13 Alternative Methoden zum Nachweis Lymphom-spezifischer Aberrationen
Interphase-FISH am Ausstrich/Tupfpräparat oder nach Kultur mit break-apart-Sonde Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation Metaphase-FISH nach Kultur mit break-apart-Sonde Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation (und des Partner-chromosoms) 24-Farben-FISH nach Kultur Nachweis der 8q- oder 2p-Translokation und des Partner-chromosoms zusätzlich weitere Aberrationen (außer inv, kleinen del oder ins) Comparative genomic hybridization (CGH) Nachweis eines Zugewinns oder Verlustes von Chromosomen-stücken oder einzelnen Genen Polymerase-Kettenreaktion (LD-PCR, RT-PCR) Nachweis des MYC- oder ALK-Rearrangements und des Fusions-partners Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

14 Probleme bei der zytogenetischen Auswertung von Lymphomen
oft normaler Karyotyp oder kein Ergebnis mögliche Ursachen: keine Proben eingesandt inadäquate Versandbedingungen nicht genügend Lymphomzellen Knochenmark ohne Befall kein Tumormaterial eingesandt eingesandtes Material kein Tumor (V.a. Lymphom) Lymphomzellen gehen schnell in Apoptose inadäquate Kulturbedingungen (Medium/Zeit) kryptische Aberrationen Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

15 Häufigkeit unterschiedlicher Karyotypen bei B-NHL
963 Patienten aus mehreren BFM-NHL Studien 199 vollständige Karyotypen Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

16 Warum Zytogenetik? spezifische Aberrationen kann man auch mit anderen Methoden nachweisen Herstellung von Metaphasepräparaten schwierig (Kultur etc.) Ergebnis fraglich (z.B. normaler Karyotyp) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

17 Häufigkeit von Sekundäraberrationen
Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

18 Häufigkeit sekundärer Aberrationen bei Burkitt-NHL
43.5 20 1q+ 6.5 3 der(3q) 10.9 5 6q- 15.2 7 +7/7q+ 9p- 50.0 23 others 39.1 18 complex 4.3 2 del(17p) 17.4 8 13q- +12/12q+ 8.7 4 11q23 % abs aberration 6.2 1 1q+ der(3q) 31.3 5 6q- +7/7q+ 9p- 75.0 13 others 24.8 4 complex del(17p) 13q- 12.5 2 +12/12q+ 11q23 % abs aberration sekundäre Aberrationen mit 8q24 Aberrationen ohne 8q24 Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

19 Häufigkeit von 2p23-Aberrationen bei ALCL
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20 Sekundäraberrationen bei NHL im Kindesalter
prognostische Bedeutung noch unklar möglicherweise schlechtere Prognose für einige Aberrationen Bedeutung für Lymphomentstehung Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

21 Problemlösung für ein gutes Ergebnis ausreichend Material verschicken
gutes Material möglichst Tumorgewebe Gewebe nicht austrocknen lassen vitale Zellen adäquate Versandbedingungen möglichst sofort versenden innerhalb von 24 Std. im Labor Kurierdienst (Ankunft bis Uhr) Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen

22 NHL-BFM-Materialversand
KM-Befall und/oder Pleuraerguss und/oder Aszites nur Tumor Punktion Biopsie Diagnosestellung NHL immunologisch und zytomorphologisch Diagnosestellung NHL histologisch und immunhistochemisch flüssiges Material heparinisiert Zytospinpräparate bzw. Ausstriche flüssiges Material heparinisiert Zytospinpräparate bzw. Ausstriche Liquor, KM, Blut, Serum Tumormaterial in Medium Tumortupfpräparate Liquor, KM, Blut, Serum Tumormaterial formalinfixiert Immunologie Immunologisches Zellmarkerlabor, Berlin Zytomorphologie / Genetik / Zellbank Onkogenetisches Labor und NHL-BFM-Studienzentrale Gießen Histologie / Immunhistochemie LK-Register, Kiel oder ein anderes referenzpathologisches Institut der NHL-BFM-Studie Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen