Ribonucleotide reductase M1 (RRM1) beim Gemcitabin-resistenten Urothelkarzinom Ulm, Mannheim, Göttingen, Frankfurt Präsentiert von F. Wezel Klinik für Urologie und Kinderurologie, Uniklinik Ulm 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

Mechanismen der Chemoresistenz DNA Damage repair Drug Efflux Epigenetics Chemoresistance Geringes Gesamtüberleben von Patienten mit metastasiertem Urothelkarzinom unter Erstlinienchemotherapie mit Gem/ Cis u.a. durch Entwicklung einer Chemo-Resistenz. Mechanismen der Resistenzentwicklung sind aktuell nur unzureichend verstanden. Vascular Niche Anti-Apoptotic Proteins Epithelial-Mesenchymal Transition 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

Mind 10x fache Dosis der initialen IC50 In vitro Modell der Chemoresistenz - Resistant Cancer Cell Line Collection (RCCL) Konzentration Chemotherapie Chemo-Naiv Adaptation Resistent ~1-2 Jahre Mind 10x fache Dosis der initialen IC50 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

‚Proteomics‘ – Screen Prinzip der Massenspektrometrie 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

SILAC Massenspektrometrie - Screen Stable isotope labeling with amino acids in cell culture RT112 Zellen Chemo-Naiv Gemcitabin-resistent 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

DNA-Synthese und DNA-Reparatur SILAC Screen Herunterregulation Hochregulation Gene/ Protein Ratio Ribonucleotide reductase M1 (RRM1) 142,37 #2 16,09 #3 13,63 DNA-Synthese und DNA-Reparatur Resistenz gegen Gemcitabine u.a. im Pankreas- und Bronchialkarzinom 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

Validierung RRM1 - Quantitative Real-Time PCR *** *** *** *** n.s. 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

Validierung RRM1 –Western Blot 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

RRM1 siRNA Knockdown 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

RRM1-Targeting mit Hydroxyurea 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

RRM1 in Liquid Biopsies N=5 Patienten mit fortgeschrittenem Urothelkarzinom unter Gem/ Cis Chemotherapie -> RNA Extraktion aus Plasma -> Vor Beginn der Chemotherapie, mind. 3 Zyklen -> Real-Time PCR 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

Zusammenfassung Identifikation von RRM1 als Gemcitabine-induzierter Marker mittels Proteom-weitem SILAC Screen. RRM1 ist hochreguliert in Gemcitabin-resistenten Urothelkarzinomzellen in vitro und in Plasma von Patienten unter Gemcitabin-haltiger Chemotherapie. RRM1 mögliches therapeutisches Target und/ oder prädiktiver Biomarker aus liquid biopsies. 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

Dankeschön Prof. C Bolenz Dr. T Martini PD Dr. C Günes Dr. P Erben Prof. MS Michel S. Schwarz A. Steidler Dr. S Vallo Prof. J Cinatl Dr. Michaelis Dr. F Bremmer 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie

Danke 29.11.2018 Universitätsklinikum Ulm | Klinik für Urologie und Kinderurologie