Nachweis von prostataspezifischen Transkripten in regionären Lymphknoten von Patienten mit Prostatakarzinom U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, M. Wirth.

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1 Nachweis von prostataspezifischen Transkripten in regionären Lymphknoten von Patienten mit Prostatakarzinom U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, M. Wirth Klinik und Poliklinik für Urologie Universitätsklinikum der TU-Dresden 1 1

2 Metastasierung beim PCa
Lymphknoten 69 % Knochen 68% Lunge 48% Leber 33% Eble 1993 2 2

3 Diagnose der Lymphknoten-Metastasierung
Serum-PSA, cT, Gleason Score Bildgebende Verfahren (CT, MRT, PET) Histopathologie 3

4 Partin-Tabelle zur Beurteilung des Lymphknotenbefalls, PSA >20 ng/ml
klinisches Tumorstadium Partin 1997

5 Sensitivität des Lymphknoten-Stagings
CT: 22% (Beer et al., 1992) MRT: 26% (Beer et al., 1992) OP+SS: 80% (Beer et al., 1992) Immunszintigraphie: 52-62% (Lamb et al., 1998) 6

6 Molekularbiologischer Nachweis von PCa-Zellen
Nachweis von prostataspezifischer mRNA Zellkern Zytoplasma DNA prostata- spez. mRNA Ribosom Protein mRNA 4 8

7 Nachweis prostataspezifischer Transkripte mittels RT-PCR
Aufschluß des Lymphknoten- Gewebes AAA AAA mRNA Isolierung der Gesamt-RNA DNase-Behandlung Umschreibung in cDNA Transkript-spezifische PCR AAA TTT cDNA AAA PCR 6 11

8 Prostataspezifische Genprodukte
PSA (Prostata Spezifisches Antigen) PSM (Prostata Spezifisches Membranantigen) Serinprotease Lokalisation: Serum Größe: 34 kDa Transkripte: PSA mRNA Folathydrolase Lokalisation: Plasmamembran Größe: 94 kDa Transkripte: PSM mRNA PSM’ mRNA PSM’’ mRNA 12

9 PSM-Gen und PSM-Transkripte
PSM bp (Israeli et al., 1993) Genstruktur 19 Exons, 20 Introns PSM’ 2387 bp (Su et al., 1995) X Deletion im Exon 1 ( ) PSM-Variante (Bzdega et al., 1997) X Deletion von Exon 18 ( )

10 RNA-Isolierung aus Lymphkno-tengewebe und Kontroll-PCR’s
Gesamt-RNA GAPDH-RT-PCR 1µg RNA verschiedener Lymphknoten 1: 123 bp DNA-Standard 2-5, 6-9: Lymphknoten Universitätsklinikum Dresden 1

11 RT-PCR zum Nachweis von PSM-Transkripten in Lymphknoten
1-3, 5-7: Lymphknoten RNA 8: pos. Kontrolle (LNCaP RNA) 9: neg. Kontrolle 10: bp DNA-Standard Universitätsklinikum Dresden

12 Nachweis von PSA-Transkripten in regionären Lymphknoten
n RT-PCR-PSA + RT-PCR-PSA - PCa/N * PCa/N PCa RCC kein Ca * 2 histologisch neg. LK, 2 vorbehandelte Patienten Sensitivität: 70,5 %, Spezifität 100 % Universitätsklinikum Dresden 15

13 Nachweis von PSM-Transkripten in regionären Lymphknoten
n RT-PCR-PSM RT-PCR-PSM - PCa/N * PCa/N PCa RCC kein Ca * histologisch neg. LK, Sensitivität: 94,1%, Spezifität: 5,4% Universitätsklinikum Dresden 15

14 Nachweis von PSM’-Transkripten in regionären Lymphknoten
n RT-PCR-PSM’ RT-PCR-PSM’- PCa/N * PCa/N PCa RCC kein Ca * histologisch neg. LK, Sensitivität: 88,2%, Spezifität: 54% Universitätsklinikum Dresden 15

15 PSA-Werte nach RPE RT-PCR PSA p. O. + PSA + /12 PSA - /42 PSM + /51
p. O. : 1-3 Wochen nach RPE Universitätsklinikum Dresden 15

16 Zusammenfassung I in metastasierten Lymphknoten:
Nachweis von Transkripten in metastasierten Lymphknoten: PSA - abhängig von Vorbehandlung PSM - nicht spezifisch für PCa PSM’ - besser als Histopathologie? 16

17 Zusammenfassung II Quantifizierung der Transkripte Follow up
Verbesserung der Aussagekraft: Quantifizierung der Transkripte Follow up 16