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Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari.

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Präsentation zum Thema: "Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari."—  Präsentation transkript:

1 Was bringt Lebewesen zum Leuchten? Zentralkurs 2009Chemie – einfach faszinierendThomas Hari

2 Das grün fluoreszierende Protein (GFP)

3 Übersicht Das GFP Experimente/Idee Resultate Kosten

4 Das GFP GFPExperimente/IdeeResultateKosten

5 3 AS bilden das Chromophor Weitere fluoreszierende Stoffe GFPExperimente/IdeeResultateKosten

6 Mutationen des GFP GFPExperimente/IdeeResultateKosten

7 Experimente / Ideen Transformation von Bakterien mit pGLO Flüssig- kultur Zellen lysieren Isolation von Plasmid-DNA Restrikitions- verdau Gelelektro- phorese Säulen- chromatographie Native PAGE SDS-PAGE GFPExperimente/IdeeResultateKosten

8 pGLO Gene für araA, araB und araD wurden durch das GFP-Gen ausgetauscht GFPExperimente/IdeeResultateKosten Aus:

9 Genregulation RNA Polymerase araC ara GFP Operon GFP Gene araC GFP Gene araC GFP Gene Effector (Arabinose) BAD araC BAD RNA Polymerase Effector (Arabinose) araC BAD ara Operon GFPExperimente/IdeeResultateKosten Aus:

10 Resultate GFPExperimente/IdeeResultateKosten Bild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

11 Bakterienkulturen GFPExperimente/IdeeResultateKosten LB-MediumLB / amp

12 Bakterienkulturen GFPExperimente/IdeeResultateKosten LB / amp /ara Ohne UV-LichtMit UV-Licht

13 Transformation von pGLO Aus: GFPExperimente/IdeeResultateKosten Kulturmedium mit Ampicillin Kulturmedium mit Ampicillin und Arabinose

14 Flüssigkulturen GFPExperimente/IdeeResultateKosten

15 Zellen lysieren GFPExperimente/IdeeResultateKosten

16 Bakterienpellets GFPExperimente/IdeeResultateKosten Werden nicht mehr verwendet

17 Säule auftragen GFPExperimente/IdeeResultateKosten

18 Säule auswaschen GFPExperimente/IdeeResultateKosten

19 3 Fraktionen GFPExperimente/IdeeResultateKosten Säule auftragen Säule waschen GFP auswaschen

20 Native PAGE GFPExperimente/IdeeResultateKosten

21 Nicht ganz einfach… GFPExperimente/IdeeResultateKosten

22 2 fluoreszierende Banden GFPExperimente/IdeeResultateKosten 27 und 37 kDa

23 SDS-PAGE GFPExperimente/IdeeResultateKosten Vor der SäuleNach der Säule

24 SDS-PAGE GFPExperimente/IdeeResultateKosten 250 kDa 150 kDa 100 kDa 75 kDa 50 kDa 37 kDa 25 kDa 20 kDa 15 kDa 10 kDa

25 SDS-PAGE GFPExperimente/IdeeResultateKosten

26 SDS-PAGE GFPExperimente/IdeeResultateKosten

27 Plasmidverdau GFPExperimente/IdeeResultateKosten pGEM1 mit Bcn1pGLO mit Bcn1 und Bam H1 pGLO mit Bam H1

28 Färbung mit Azur Blau GFPExperimente/IdeeResultateKosten

29 Bild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

30 GFPExperimente/IdeeResultateKosten Bild: Olivier Brandenberger; Prima 2005/2006

31 Kosten GFPExperimente/IdeeResultateKosten 2 Kits mit Material wird geliefert Relativ teuer Zusätzliches Material: Zentrifuge Gel-Apparatur vertikal Gel-Apparatur horizontal Heizblock Mikropipetten (bis 1  l) Restriktionsenzym Proteinelektrophorese:

32 Alternative: Genspirale Apparaturen werden ausgeliehen (Ausnahme: SDS-PAGE) Kosten für Verbrauchsmaterial: SFr. 50.– (Kurs gemacht) Zusätzliches Material von BioRad: Säulen Plasmid Puffer selber herstellen GFPExperimente/IdeeResultateKosten

33 Weiter Dokumente auf der Homepage des Gymnasiums Thun-SchadauGymnasiums Thun-Schadau Fachschaft Chemie; Unterrichtsmaterialien Thomas Hari


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