Nachweis von E. coli / Coliformen Auswertung der Untersuchungen im Rahmen des Praktikums Wasserhygiene SS 2007 Katharine Moritz Ulrike Frömmel

Einleitung E.Coli REM E.Coli Gramfärbung

Coliforme Bakterien Familie: Enterobacteriaceae Gattungen: Escherichia coli Enterobacter amnigenus Enterobacter cloacae Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Citrobacter freudii gramnegativ nicht sporenbildend Cytochromoxidase- negativ stäbchenförmig Lactosevergärung zu Säure und Gas (48 h, 37 °C) Glucosefermentation

Coliforme Bakterien Vorkommen in der Umwelt und der Darmflora von Warmblütern Nutzung als Indikatorbakterien zur hygienisch-bakteriologischen Überwachung des Trinkwassers Hinweis auf mögliche Verunreinigung, oder ungenügende Desinfektion des Wassers

Anforderungen an Hygieneindikatoren • Sie sollten ein Teil der normalen Darmflora von gesunden Menschen sein (ideal wäre, wenn sie nur im menschlichen Magen-Darm-Trakt vorkämen). Sie sollten nur dann anwesend sein, wenn es wahrscheinlich ist, dass Krankheitserreger fäkalen Ursprungs anwesend sind. Sie sollten in einer größeren Anzahl zu finden sein als die Krankheitserreger, die sie anzeigen sollen. • Sie sollten auch außerhalb des Verdauungstraktes wachsen und in der Natur widerstandsfähiger sein als pathogene Mikroorganismen. • Sie sollten unter natürlichen Lebensbedingungen sowie nach Wasseraufbereitung resistenter sein als Krankheitserreger und in größerer Anzahl überleben. • Sie sollten einfach isolierbar, identifizierbar und zählbar sein. • Sie sollten selbst nicht eine Krankheit verursachen. • Die Anzahl der Indikatorbakterien sollte in Relation zur Menge der pathogenen Mikroorganismen stehen. Es gibt keinen Organismus, der alle diese an einen Indikatorkeim gestellten Anforderungen erfüllt.

Durchführung

Nachweis von Coliformen Bestimmung des Coli-Titers  kleinste Wassermenge in mL, in der noch Bakterien in Kultur nachgewiesen werden können MPN- Verfahren  höchstwahrscheinliche Keimzahl je 1 ml Probe Anlegen von Subkulturen  zur Bestätigung der nach der Anreicherung positiv beurteilten Kulturen Beimpfung von ENDO-Agar und Tergitol-7-Agar Biochemische Identifizierung  „Bunte Reihe“: Oxidase, Citratverwertung, Glc- und Lac- verwertung, Indolbildung, Harnstoffverwertung, Methylrot, Voges-Proskauer, Kliegler-Agar

Untersuchte Wasserproben Bezeichnung Probe Erwartete Belastung mit E. coli/ Coliformen TW Trinkwasser 0 in 100 ml EL Elbe an der Fährstelle Kötitz gering QW Quellwasser BrW Brunnenwasser PKA-ZL Zulauf Pflanzenkläranlage hoch PKA-AL Ablauf Pflanzenkläranlage KA-ZL Zulauf Kläranlage KA-AL Ablauf Kläranlage BW Badeteich TS Talsperre Malter; Badebereich

Ergebnisse

Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren I Wasserprobe BrW BaW TS AL-KA Verdünnung 0ri 10 ml 0ri 1 ml 0.1 0.01 ori 0.001 0.0001 0.00001 MUG-Bouillon (+ = trüb) ++ ++  + -  --  ENDO-Agar (+ = E.coli)    -- Tergitol-7-Agar (+ = E.coli) nachgewiesene MO  E. coli  Klebsiella (?) Citrobacter freundii

Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren II Wasserprobe ZL-KA AL-PKA ZL-PKA   EL Verdünnung 0.001 0.0001 0.00001 0.000001 0.0000001 0.01 MUG-Bouillon (+ = trüb)  ++ ++  +-  --  + -  ++ ENDO-Agar (+ = E.coli)  - -  Tergitol-7-Agar (+ = E.coli) + - -- nachgewiesene MO Coliforme  E. coli  Klebsiella

Coli-Titer Wasserprobe Coli-Titer Brunnenwasser 0,01 Badewasser 10 Talsperre AL-Kläranlage 0,001 ZL-Kläranlage 0,000001 Al-Pflanzenkläranlage 0,0001 ZL-Pflanzenkläranlage Elbewasser < 0,00001

Quantifizierung von Coliformen nach dem MPN-Verfahren (Wasserproben)   BrW BaW TS AL-KA ZL-KA AL-PKA ZL-PKA EL MPN 70 0,62 2400 240000 6200 210000 70000 LL 0,1 500 50000 1000 61000 UP 3,8 11000 1100000 38000 730000

Quantifizierung von E. coli nach dem MPN-Verfahren Elbewasser Mikrotiterplatte Messung der Fluoreszenz MPN = 6.3 LL = 3.1 UL = 13 Verdünnungsstufe Platz 0.1 0.01 0.001 1 2 3 4 5 6 7 8 9 11 12 13 14 15 16

Membranfilterverfahren (NKS)   Endo Tergitol Gruppe BW 1 ml BW 10 ml TW 100 ml e.coli coliforme 1 20 nzb 38 2 29 160 7 3 12 50 60 4 27 5 6 8 Durchschnitt 40 11 Durchschnitt (KbE BW/ ml) (KbE TW/ 100ml) 6,4 5,5

Membranfilterverfahren (NKS) Auf ENDO-NKS kein Nachweis von E. coli /Coliformen

Vielen Dank für die Aufmerksamkeit!