Molekulare Zellbiologie

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 Präsentation transkript:

Molekulare Zellbiologie Molekularbiologische Methode - Genexpression 31.12.2018 Sebők Ágnes

Polymerasekettenreaktion (PCR) In vitro DNA-Synthese Hitzestabile DNA-Polymerase Primer-Paar Zyklen: 1. Denaturierung (95 C) 2. Primer-Bindung (60 C) 3. Primer-Verlängerung – DNA synthese (60-70 C) (Gelelectrophoresis) 31.12.2018 Sebők Ágnes

PCR - Anwendung (Fragen) Existenz einer Sequenz (Infections, Krebs) Klonierung (Amplifizierung) Mutationsanalyse (Länge der DNA-Fragment) Quantität einer Sequenz – Real-time PCR 31.12.2018 Sebők Ágnes

Real-time PCR In vitro DNA-Synthese Primer-Paar Hitzestabile DNA-Polymerase Primer-Paar Dritte Primer : mit fluroreszent Farbsott und Auslöscher Polimerase macht fluoreszent Farbstoff frei – gleichzeitige (real-time) Quantifikation 31.12.2018 Sebők Ágnes

Genexpression DNA mRNA Protein Phenotyp Transcription Translation Protein-Function Phenotyp 31.12.2018 Sebők Ágnes

Gentechnik in vivo Expression von fremden Genen Hinderung der endogenen Gen-Expression 31.12.2018 Sebők Ágnes

Gentechnik in vivo 1. Expression von fremden Genen Gen-Transfer in Zelle Transgene Organisme 31.12.2018 Sebők Ágnes

Hinderung der endogenen Genexpression – I. I. DNA KO-mutation 31.12.2018 Sebők Ágnes

Hinderung der endogenen Genexpression – II. II. RNA Antisense RNA Ribosyme RNA-Interferenz 31.12.2018 Sebők Ágnes

Hinderung der endogenen Genexpression – III. III. Proteine Microinjection von Antikörper Intrazellulläre Antikörper Expression von dominanten hemmenden Proteinen Peptidomimetiken 31.12.2018 Sebők Ágnes