Nachweis verschiedener mRNA‘s des Prostataspezifischen Membranantigens in Lymphknoten von PCa-Patienten U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, J. Herrmann, M. Wirth Klinik und Poliklinik für Urologie Universitätsklinikum der TU-Dresden 1 1

Metastasierung beim PCa Ausbreitung: Lymphbahnen peripheres Blut Ansiedlung: Lymphknoten 69 % Knochen 68% Lunge 48% Leber 33% Eble 1993 2 2

Diagnostik der Lymphknoten-Metastasierung Serum-PSA Tumorstadium, Gleason Score Bildgebende Verfahren (CT, MRT, PET) Histopathologie 3

Einschätzung der Lymphknoten-Metastasierung, PSA >20 ng/ml Wahrschein- lichkeit % Gleason Score Tumorstadium Partin 1997

Molekularer Nachweis von PCa-Zellen Nachweis prostataspezifischer mRNA Zellkern Zytoplasma Prostata- spezifische mRNA DNA Ribosom Protein mRNA 4 8

Nachweis prostataspezifischer Transkripte mittels RT-PCR Lymphknoten-gewebe AAA mRNA AAA Isolierung der Gesamt RNA Dnase I-Behandlung cDNA-Synthese Transkript-spezifische PCR AAA TTT cDNA AAA PCR 6 11

Das prostataspezifische Membranantigen (PSM) Lokalisierung des Proteins Lokalisation: Plasmamembran Funktion: Folathydrolase Größe: 94 kDa extrazellulär Gene structure intrazellulär 12

PSM-Gen und Transkripte PSM - 2653 bp (Israeli et al., 1993) Chromosom 11 PSM-Gen PSM’ 2387 bp (Su et al., 1995) X 19 Exons, 20 Introns Deletion im Exon 1 (114-380) PSM mRNA 2653 bp PSM-Variante (Bzdega et al., 1997) X Deletion von Exon 18 (657-688)

Patientenkollektiv 16 hormonell vorbehandelt 60 PCa-Patienten (232 Lymphknoten) 16 hormonell vorbehandelt 17 pTN1 32 pT2N0 8 pT3N0 3 pT4N0 3 Patienten mit Nieren bzw. Blasentumor 2 Patienten ohne maligne Erkrankung

RT-PCR zum Nachweis von PSM-Transkripten 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1-3, 5-7: Lymphknoten von PCa-Patienten 8: pos. Kontrolle (LNCaP) 9: neg. Kontrolle 10: 123 bp DNA Standard Urologische Klinik Universitätsklinikum Dresden

Nachweis von PSM-Transkripten in regionären Lymphknoten n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM - PCa/N+ 17 16 1* PCa/N- 43 41 2 PCa 60 57 3 RCC 3 3 0 kein Ca 2 0 0 * histologisch neg. LK, Sensitivität: 94,1%, Spezifität: 4,7% Urologische Klinik Universitätsklinikum Dresden 15

Nachweis von PSM’-Transkripten in regionären Lymphknoten n RT-PCR-PSM’ + RT-PCR-PSM’- PCa/N+ 17 15 2 * PCa/N- 43 22 21 PCa 60 37 23 RCC 3 2 1 kein Ca 2 0 0 * histologisch neg. LK, Sensitivität: 88,2%, Spezifität: 48,8% Urologische Klinik Universitätsklinikum Dresden 15

Verteilung der PSM- und PSM’-Transkripte bei PCa-Patienten n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM’+ pT2N0 32 31 (97%) 16 (50%) pT3N0 8 7 (88%) 5 (63%) pT4N0 3 3 (100%) 1 (33%) Gls 2-3 4 4 (100%) 2 (50%) Gls 4-6 27 26 (96%) 17 (63%) Gls 7-9 13 12 (92%) 9 (69%) Urologische Klinik Universitätsklinikum Dresden 15

RT-PCR oder Histopathologie ? alle histologisch positiven Lymphknoten mit der RT-PCR für PSM und PSM‘ erkannt PSM: - hohe Sensitivität, geringe Spezifität - ungeeigneter Marker PSM‘: - hohe Sensitivität, Spezifität von 48% - positive Korrelation zwischen PSM‘-RT-PCR und Gleason Score - sensitiverer Nachweis von PCa-Zellen gegenüber Histopathologie ? Bestimmung der Relevanz von PSM‘ im follow up