Aminosäureanalyse von Peptiden und Proteinen Diana Akopyan Universität Leipzig Chemie, Bachelor of Science 6. Fachsemester
Aminosäureanalyse von Peptiden und Proteinen
Saure Hydrolyse Versuche mit kleinen Peptiden haben gezeigt, dass bei Raumtemperatur und pH 7 die Halbwertszeit ca. 500 Jahre beträgt =>6 N HCl (24 Stunden bei 110 °C) unter Ausschluss von Sauerstoff Eventuell Zugabe von scavenger
Enzymatische Hydrolyse
Die freien Aminosäuren werden über Ionenaustausch- chromatographie mit einem Stufengradienten aufgetrennt
Nachsäulenderivatisierung Ninhydrin bewirkt eine oxidative Decarboxylierung der Aminosäure, wobei der gebildete Ammoniak und Hydrindantin mit einem weiteren Ninhydrinmolekül einen purpurnen Farbstoff (Ruhemanns Violett ) bilden.
Vorsäulenderivatisierung
Flüssigchromatographie Die polaren Aminosäuren werden durch die Kopplung mit einem aromatischen Rest wesentlich hydrophober und lassen sich so ideal durch Chromatographien an reversed-phase-Materialien trennen
4. Aminosäureanalyse mit massenspektrometrischer Detektion Proteine werden Ionisiert und durch ein elektrisches Feld beschleunigt Proteine treffen an bestimmter Flugzeit auf dem Detektor auf → jedes Protein hat dabei eine spezifische Flugzeit → mit Hilfe komplexer Computerauswertung lassen sich Übersichten der Proteinvielfalt der Probe erstellen
Literatur F. Lottspeich, J. W. Engels (Hrsg.) Bioanalytik, 3. Auflage, Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2012, s. 335-347 http://www.chem.uzh.ch/robinson/lectures/AC_BII/Kap15/ka p15.html (Stand: 04.06.19) https://www.spektrum.de/lexikon/biochemie/proteine/5109 (Stand: 04.06.19) https://www.studocu.com/de/document/humboldt- universitaet-zu-berlin/grundlagen-der- biochemie/mitschriften/biochemie-zf-vl-05-vorlesungsnotizen- 5/2743601/view (Stand: 04.06.19) http://www.biologie.uni- regensburg.de/Biochemie/Deutzmann/Praktika/AS_analytik_ WS12.pdf (Stand: 04.06.19)
Vielen Dank für die Aufmerksamkeit!