Trans-well Migrations-Assay

Präsentation zum Thema: "Trans-well Migrations-Assay"—  Präsentation transkript:

1 Trans-well Migrations-Assay
Block: „Molekulare Zellbiologie von Immunzellen“ SS 2008 Trans-well Migrations-Assay

2 Hintergrund Cytohesin ist für die Chemokin-induzierte Aktivierung von beta-2 Integrinen und für die RhoA-regulierte Integrin-unabhängige Migration wichtig. SecinH3 bindet an die Sec7-Domäne der Mitglieder der Cytohesin-Familie und inhibiert dadurch den Guaninnukleotid-Austausch.

3 Ziel des Versuchs Beobachtung, ob SecinH3 die Migration der T-Zelllinie Jurkat E6 in Richtung des Chemokins CXC12 beeinflusst.

4 Versuchsaufbau

5 Ergebnisse Ausgangszellzahl/well = 2,0·106 Zählung 1 Zählung 2
Zählung 1 Zählung 2 Zellen/ Großquadrat Zellzahl/ml Zellzahl/well Migration [%] Kontrolle ohne Chemokin 51 (4) - 12,75 1,28 ·105 8,93 ·104 4,46 Kontrolle mit Chemokin 399 (2) 199,5 2,00 ·106 1,40 ·106 69,83 0,5µM SecinH3 346 (2) 230 (2) 173 1,73 ·106 1,21 ·106 60,55 1µM SecinH3 652 (4) 238 (2) 163 1,63 ·106 1,14 ·106 57,05 10µM SecinH3 488 (4) 322 (4) 101,25 1,01 ·106 7,09 ·105 35,44 Ausgangszellzahl/well = 2,0·106

6 Ergebnisse

7 Ergebnisse

8 Fazit SecinH3 beeinflusst die Migration der T-Zellen in Richtung des Chemokins. Je höher die Konzentration von SecinH3, desto geringer die Migration. Wenig Unterschied zwischen 0,5µM und 1µM SecinH3  Wirkungsgrenze