Lipide

Grundlagen Was sind Lipide? Arten und Funktionen von Lipiden Glycerophospholipide Mono-, Di- und Triglycerine Ergosteriol und Ergosterylester Freie Fettsäuren Sphingolipide Isolierung Auftrennung Wieso 2D DC? Nachweis

Arbeiten mit radioaktiven Substanzen Eigener Bereich für radioaktives Arbeiten Art der Strahler Umgang mit radioaktiven Substanzen Substanzen gesondert entsorgen Nach abgeschloßener Arbeit: Dekontamination des Arbeitsplatzes

Durchführung

Vorbereitung der Hefekultur Zellkonzentration mittels OD bestimmen Zellen in Minimalmedium vorinkubieren

Zugabe von 1-14C-Palmitinsäure Lösung inkubieren BSA-Lösungzugeben Zellpellet waschen

Aktivität der Fraktionen bestimmen Zellen aufschließen Lipide extrahieren Mittels DC auftrennen Aktivität der Fraktionen bestimmen

Durchführung des Aktivitätsassays Vorbereitung des Reaktionsansatzes Zuagen von Stopplösung nach 0, 10, 20 Minuten Bestimmen der Aktivität

Spezifische Aktivität der Palmitinsäure Theoretische Totalaktivität Berechnungen Zählausbeute Probe Cocktail cpmLE cpmBW dpmLE dpmBW cpm*/dpm* %Zählausbeute 6 Safety Cocktail MW Probe 6 MW Probe 9 (Probe6-Probe9)/(Probe6-Probe9) cpm*/dpm*100 7 Safety Cocktail + H2O MW Probe 7 MW Probe 10 (Probe7-Probe10)/(Probe6-Probe9) 8 Safety Cocktail + H2O + Kieselgel MW Probe 8 MW Probe 11 (Probe8-Probe11)/(Probe6-Probe9) Spezifische Aktivität der Palmitinsäure GBq/mmol dpm/mmol cpm/mmol 2,1 2,1*60 *10^9 dpm*Zählausbeute Theoretische Totalaktivität MBq/100ml fV dpm/10ml 37 10 37*60/fV*10^6 Bilanz Probe Messvolumen µl cpm/Messung cpm*/Messung Gesamtvolumen ml Gesamtaktivität dpm Totalaktivität 100 MWProbe 1 Probe1-Probe6 10,1 cpm*/Zählausbeute*Messvolumen/Gesamtvolumen Medium MWProbe2 Probe2-Probe6 11 Waschwasser1 MWProbe 3 Probe3-Probe6 5 Waschwasser2 MWProbe 4 Probe4-Probe6 10 Zellen MWProbe 5 Probe5-Probe6

theorethische Konzentration 37000*60*1000/10,1/132000000 µmol/l Aufnahmerate theorethische Konzentration 37000*60*1000/10,1/132000000 µmol/l tatsächliche Konzentration cpm*Totalaktivität/Zählausbeute*10000/132000000 Zellkonzentration 1 mg/ml Inkubationszeit 10 min Einbau GesamtaktivitätZellen/GesamtaktivitätTotalaktivität*100 % GesamtaktivitätZellen/100*Zählausbeute cpm*/(mg*min) GesamtaktivitätZellen/100 dpm*/(mg*min) GesamtaktivitätZellen/100/1,32*10^8 nmol/(mg*min) Gesamtlipide cpm cpm* % AktivitätLSC % Gesamtaktivität Phospholipide MW MW-BW MW-BW/Summe MW-BW MW-BW/MW-BW Diacylglycerine freie Fettsäuren Triacylglycerine Sterolester Summe Summe MW Summe MW-BW Summe=100% Summe MW-BW/MW-BW Gemessene Gesamtaktivität

Gemessene Gesamtaktivität Phospholipide cpm cpm* % Aktivität 1.Dim % Aktivität 2.Dim % Gesamtaktivität PC 2421 2345 42,6 30,8 28,8 PS 481 405 7,4 5,3 5,0 PI 1958 1882 34,2 24,8 23,1 PE 826 750 13,6 9,9 9,2 DMPE 57 0,0 PA 439 363 6,6 4,8 4,5 LP 152 76 1,4 1,0 0,9 CL 25 FS 536 460 8,3 6,1 5,6 JVL 1398 1322 24,0 17,4 16,2 Summe 8293 7603 138,0 100,0 93,4 Gemessene Gesamtaktivität 8219 8143

Anfangsgeschwindigkeit Serin konz. Ci/ml Ci/mmol Bq/mmol dpm/mmol 0,001 29,5 1,0915E+11 6,549E+12 1Ci 3,7E+10Bq Anfangsgeschwindigkeit zeit dpm mmol nmol nmol*f 173 2,64E-11 2,64E-05 0,01 MW MW/6,55E+12 mmol *E+6 nmol*442,25 10 11976 1,83E-09 0,00183 0,81 MW/6,55E+13 20 29808 4,55E-09 0,00455 2,01 MW/6,55E+14

Diskussion

Aktivitätsassay