Chantale Sevenich, Viviana Mandalà Gelelektrophorese Chantale Sevenich, Viviana Mandalà

Übersicht Grundwissen über Elektrophorese Arten der Elektrophorese Grundwissen Gelelektrophorese Vor- und Nachteile Einsatzbereiche Ablauf einer Gelelektrophorese Auswertung Genvergleich eines Carzinompatienten

Grundwissen zur Elektrophorese Ist ein analytisches Verfahren, das durch den Einsatz eines elektrischen Feldes, verschiedene Moleküle voneinander trennt. Elektrophorese bezeichnet die Wanderung geladener Teilchen im elektrischen Feld. Einzelne Moleküle bewegen sich in dem Feld aufgrund ihrer elektrischen Ladung und Größe unterschiedlich schnell. Folge: Auftrennung der Moleküle

Arten der Elektrophorese Kapillarelektrophorese Zonenelektrophorese Disk-Elektrophorese Isoelektrisch Gelelektrophorese

Grundwissen Gelelektrophorese Bei Anlegen einer elektrischen Spannung wandern die leicht negativ geladenen DNA-Moleküle durch das Gel zur Anode. Das Gel funktioniert wie ein Sieb Kleine Moleküle können schneller durch das Gel laufen, als große und werden dadurch aufgetrennt. Durch das im Gel eingelagerte Ethidiumbromid wird die DNA im UV-Licht sichtbar

Vor- und Nachteile der Gelelektrophorese Vorteile: Gel ist leicht gießbar und denaturiert nicht in den Proben Ist eine wenig zeitaufwendige Technik zur Analyse von PCR-Produkten Nachteile: Gel kann während Elektrophorese schmelzen, Puffer erschöpft, Genmaterial läuft nicht immer gleich (schnell)

Die Einsatzbereiche Analyse von Desoxyribonukleinsäure (DNA) Analyse von Ribonukleinsäure (RNA) Allgemeine Proteinauftrennung Proteinreinigung

Ablauf einer Gelelektrophorese In einer Duranflasche wird die Agarose eingewogen und mit TBE-Puffer versetzt In der Mikrowelle wird das Gemisch aufgekocht und die Agarose eingeschmolzen Lösung abkühlen und Ethidiumbromid zugeben Die Lösung wird nun in den Gießstand gegossen, indem Kämme eingesetzt sind (=DNA Taschen) Das Gel polymerisiert aus und wird im Kühlschrank gelagert

Ablauf einer Gelelektrophorese Die Kammer wird mit Puffer gefüllt Das Tablett wird mit dem Gel in die Kammer gelegt DNA mit Leiter und Ladepuffer wird in die Taschen geladen Kammer verschließen Strom einschalten

Ablauf einer Gelelektrophorese Bei 160V/400mA läuft das Gel ca. 75mins. Ende der Elektrophorese, wenn die blaue Front kurz vor dem Ende des Gels ist Strom abschalten und Gel aus der Kammer nehmen

Die Auswertung Gelstreifen auf den Transilluminatoren legen (ohne Luftblasen) UV-Lampe (312nm) einschalten und Gel digital und fotografisch festhalten Optische Auswertung der Banden

Genvergleich eines Carzinompatienten Einteilung der Patienten in Kontrollkollektiv und Krebskollektiv anhand der Diagnosen Blutabnahme und Isolierung der DNA PCR und Gelelektrophorese Genvergleich der Kollektive, wenn Gen vorhanden, könnte der Krebs in diesem Gen verschlüsselt sein Andere Zusammensetzung der DNA