Nachweis der PCR-Produkte durch Agarose-Gelelektrophorese

Präsentation zum Thema: "Nachweis der PCR-Produkte durch Agarose-Gelelektrophorese"—  Präsentation transkript:

1 Nachweis der PCR-Produkte durch Agarose-Gelelektrophorese
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2 1. Vorbereiten der Gelkammer
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3 1. Vorbereiten der Gelkammer
g Agarose werden mit 33 ml TAE-Puffer in einen 100 ml Erlenmeyerkolben gegeben! 1.2 Kochen Sie das Gemisch in der Mikrowelle kurz auf, schwenken Sie um und kochen Sie erneut kurz auf! 1.3 Lassen Sie die Agarose-Lösung auf 55°C abkühlen (Handrückentest) und gießen Sie das Gel! DNA-Fingerprint

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5 1. Preparation of the Gel Chamber
1.4 Entfernen Sie nach dem Erstarren des Gels die Metallkeile! 1.5 Überschichten Sie das Gel mit 270 ml TAE- Puffer (1 fach)! 1.6 Ziehen Sie den Kamm! DNA-Fingerprint

6 2. Probenvorbereitung für Agarose-Gelelektrophorese
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7 2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese
2.1 Entnehmen Sie Ihre 6 PCR-Tubes aus dem Thermocycler! 2.2 Setzen Sie Ihre PCR-Tubes in die Tube- adapter! DNA-Fingerprint

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9 2. Vorbereiten für Agarose-Gelelektrophorese
2.3 Pipettieren Sie 5 µl Orange G Loading dye (LD) in jedes der 6 PCR-Tubes und durchmischen Sie durch Auf- und Abpipettieren! DNA-Fingerprint

10 3. Befüllen der Geltaschen
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11 3. Befüllen der Geltaschen
3.1 Befüllen Sie die Geltaschen von links nach rechts mit: - 12 µl Molekulargewichts-Standard (MWR) - 20 µl –GVL Kontrolle mit PMM (1) - 20 µl –GVL Kontrolle mit GMM (2) - 20 µl LM-Probe (T) mit PMM (3) - 20 µl LM-Probe (T) mit GMM (4) - 20 µl +GVL-DNA mit PMM (5) - 20 µl +GVL-DNA mit GMM (6) DNA-Fingerprint

12 4. Durchführen der Gelelektrophorese
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14 4. Durchführen der Gelelektrophorese
4.1 Verschließen Sie die Gelkammer und starten Sie die Elektrophorese bei 100 V! 4.2 Beenden Sie die Elektrophorese kurz bevor der rote Farbstoff Orange G das Gelende erreicht hat! DNA-Fingerprint

15 5. Färben des Gels DNA-Fingerprint

16 5. Färben des Gels 5.1 Öffnen Sie die Gelkammer und dekantieren Sie den TAE-Puffer ab! (Wiederverwendung des Puffers ist möglich!) 5.2 Überführen Sie das Gel in eine Färbe- schale und überschichten Sie es 5 Minuten mit 70 ml Färbelösung (100 fach)! DNA-Fingerprint

17 5. Making DNA Fragments Visible
5.3 Gießen Sie die Färbelösung ab und entfärben Sie das Gel 25 Minuten in der Färbeschale in lauwarmem Wasser! DNA-Fingerprint

18 6. Gelauswertung DNA-Fingerprint

19 6. Evaluation 6.1 Identifizieren Sie die DNA-Banden im Gel anhand des Molekulargewichts- Standards mit: 100 bp, 200 bp, 500 bp, 700 bp, 1000 bp! DNA-Fingerprint

20 6. Evaluation 6.2 Enthält Ihre untersuchte Lebensmittelprobe (T) einen Anteil einer gentechnischen Veränderung? 6.3 Vergleichen Sie Ihre Ergebnisse mit den DNA-Banden nach der PAGE! DNA-Fingerprint