Nachweis von prostataspezifischen Transkripten in regionären Lymphknoten von Patienten mit Prostatakarzinom U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, M. Wirth Klinik und Poliklinik für Urologie Universitätsklinikum der TU-Dresden 1 1

Metastasierung beim PCa Lymphknoten 69 % Knochen 68% Lunge 48% Leber 33% Eble 1993 2 2

Diagnose der Lymphknoten-Metastasierung Serum-PSA, cT, Gleason Score Bildgebende Verfahren (CT, MRT, PET) Histopathologie 3

Partin-Tabelle zur Beurteilung des Lymphknotenbefalls, PSA >20 ng/ml klinisches Tumorstadium Partin 1997

Sensitivität des Lymphknoten-Stagings CT: 22% (Beer et al., 1992) MRT: 26% (Beer et al., 1992) OP+SS: 80% (Beer et al., 1992) Immunszintigraphie: 52-62% (Lamb et al., 1998) 6

Molekularbiologischer Nachweis von PCa-Zellen Nachweis von prostataspezifischer mRNA Zellkern Zytoplasma DNA prostata- spez. mRNA Ribosom Protein mRNA 4 8

Nachweis prostataspezifischer Transkripte mittels RT-PCR Aufschluß des Lymphknoten- Gewebes AAA AAA mRNA Isolierung der Gesamt-RNA DNase-Behandlung Umschreibung in cDNA Transkript-spezifische PCR AAA TTT cDNA AAA PCR 6 11

Prostataspezifische Genprodukte PSA (Prostata Spezifisches Antigen) PSM (Prostata Spezifisches Membranantigen) Serinprotease Lokalisation: Serum Größe: 34 kDa Transkripte: PSA mRNA Folathydrolase Lokalisation: Plasmamembran Größe: 94 kDa Transkripte: PSM mRNA PSM’ mRNA PSM’’ mRNA 12

PSM-Gen und PSM-Transkripte PSM - 2653 bp (Israeli et al., 1993) Genstruktur 19 Exons, 20 Introns PSM’ 2387 bp (Su et al., 1995) X Deletion im Exon 1 (114-380) PSM-Variante (Bzdega et al., 1997) X Deletion von Exon 18 (657-688)

RNA-Isolierung aus Lymphkno-tengewebe und Kontroll-PCR’s Gesamt-RNA GAPDH-RT-PCR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1µg RNA verschiedener Lymphknoten 1: 123 bp DNA-Standard 2-5, 6-9: Lymphknoten Universitätsklinikum Dresden 1

RT-PCR zum Nachweis von PSM-Transkripten in Lymphknoten 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1-3, 5-7: Lymphknoten RNA 8: pos. Kontrolle (LNCaP RNA) 9: neg. Kontrolle 10: 123 bp DNA-Standard Universitätsklinikum Dresden

Nachweis von PSA-Transkripten in regionären Lymphknoten n RT-PCR-PSA + RT-PCR-PSA - PCa/N+ 17 12 5* PCa/N- 37 0 37 PCa 54 12 42 RCC 3 0 0 kein Ca 2 0 0 * 2 histologisch neg. LK, 2 vorbehandelte Patienten Sensitivität: 70,5 %, Spezifität 100 % Universitätsklinikum Dresden 15

Nachweis von PSM-Transkripten in regionären Lymphknoten n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM - PCa/N+ 17 16 1* PCa/N- 37 35 2 PCa 54 51 3 RCC 3 3 0 kein Ca 2 0 0 * histologisch neg. LK, Sensitivität: 94,1%, Spezifität: 5,4% Universitätsklinikum Dresden 15

Nachweis von PSM’-Transkripten in regionären Lymphknoten n RT-PCR-PSM’ + RT-PCR-PSM’- PCa/N+ 17 15 2 * PCa/N- 37 17 20 PCa 54 32 22 RCC 3 2 1 kein Ca 2 0 0 * histologisch neg. LK, Sensitivität: 88,2%, Spezifität: 54% Universitätsklinikum Dresden 15

PSA-Werte nach RPE RT-PCR PSA p. O. + PSA + /12 PSA - /42 PSM + /51 p. O. : 1-3 Wochen nach RPE Universitätsklinikum Dresden 15

Zusammenfassung I in metastasierten Lymphknoten: Nachweis von Transkripten in metastasierten Lymphknoten: PSA - abhängig von Vorbehandlung PSM - nicht spezifisch für PCa PSM’ - besser als Histopathologie? 16

Zusammenfassung II Quantifizierung der Transkripte Follow up Verbesserung der Aussagekraft: Quantifizierung der Transkripte Follow up 16