Michèle Scherrer Andreas Früh

Präsentation zum Thema: "Michèle Scherrer Andreas Früh"—  Präsentation transkript:

1 Michèle Scherrer Andreas Früh
Gruppe 3 Michèle Scherrer Andreas Früh

2 Thema 1 : Burst Kinetik

3 Aufbau eines Stopped-Flow System und Anwedungsmöglichkeiten

4 Der Konzentrationsverlauf der Burst Kinetik anhand des Ersatzmechanismus

5 Das experimentelle Konzept zur Bestimmung von c0E via Burst-Kinetik
Ausgehend von Gleichung 6.3 vom Skript: Zu Beachten ist aber, Bei der Spektroskopie wird nicht direkt eine Konzentration-Zeit-Kurve aufgenommen, sonder mit Absorbence gearbeitet Das verwendete Substrat (para-Nitrophenylacetat) besitzt eine Autohydrolyse, welche 0.Ordnung ist.

6 Das experimentelle Konzept zur Bestimmung von c0E via Burst-Kinetik
Kalibrationsreihe: ε = l/mol*cm Konzentration Absorbence [A] 1.00E-08 0.0005 1.00E-07 0.0019 1.00E-06 0.0093 1.00E-05 0.1476 1.00E-04 1.4135 1.00E-03 2.8491

7 Das experimentelle Konzept zur Bestimmung von c0E via Burst-Kinetik
Autohydrolyse:

8 Das experimentelle Konzept zur Bestimmung von c0E via Burst-Kinetik

9 Die direkte Ermittlung der Reaktionsparameter aus der Absorbanz-Zeit-Kurve

10 Auswertungen (Datenanalyse mit Sigma Plot und Berkeley Madonna) und Resultate

11 Thema 2 : Active Site Titration
Bestimmung der molaren Enzymkonzentration

12 Grundlagen der active site Titration
X

13 Grundlagen der active site Titration
X X

14 Experimentelles Konzept zur Bestimmung der aktiven molaren Enzymkonzentration

15 Experimentelles Konzept zur Bestimmung der aktiven molaren Enzymkonzentration

16 Auswertung und Resultate

17 Auswertung und Resultate

18 Normalität statt Units/g Molarität u. Gehalt mit Anzahl Acitve Sites
Unterschiede zwischen der active site Titration und der Aktivitätsbestimmung eines Enzymes Normalität statt Units/g Molarität u. Gehalt mit Anzahl Acitve Sites Unabhängig von Temperatur, Ionenstärke, pH, Cofaktoren, Inhibitoren, Aktivtoren usw. All-or-none assay

19 Vielen Dank für eure Aufmerksamkeit