Hämostasediagnostik - Allgemeine Aspekte - Spezielle Aspekte

Präsentation zum Thema: "Hämostasediagnostik - Allgemeine Aspekte - Spezielle Aspekte"—  Präsentation transkript:

1 Hämostasediagnostik - Allgemeine Aspekte - Spezielle Aspekte
Hannover, November 2005

2 Allgemeine Aspekte - Testsystematik - Qualitätssicherung
- Befundinterpretation

3 Testsystematik - Phänotyp-Analytik - Funktionelle Testverfahren
- Strukturelle Testverfahren - Genotyp-Analytik - DNA-basiert - RNA-basiert

4 Funktionelle Testverfahren
- Funktionelle Testverfahren bestimmen die biologische Aktivität eines Analyten. - Testmatrix: Vollblut, plättchenreiches Plasma oder plättchenarmes Plasma - „Read-out-System“: - turbidometrisch - koagulometrisch - amidolytisch

5 Thromboplastinzeit Messprinzip: koagulometrisch
Messparameter: Fibrinbildung Messgröße: Gerinnungszeit in Sek. Befundmitteilung: in Prozent bezogen auf Normalplasma Prothrombin-Ratio

6 International normalized ratio (INR)
Patientenwert Prothrombin-Ratio = Normalwert INR = Prothrombin-RatioISI-Wert ISI = International Sensitivity Index

7 Korrelation „Quick-Wert“ und INR

8 Koagulometrisches Testverfahren
Thrombin Fibrinogen Fibrin Messparameter: Fibrinbildung

9 Amidolytisches Testverfahren
Thrombin H-D-Phe-Pip-Arg-pNA pNA Messparameter: Hydrolyse eines Peptidsubstrats

10 Thrombinbestimmung: koagulometrisch

11 Thrombinbestimmung: amidolytisch

12 TF-induced thrombin formation
clot formation

13 Amidolytische Testverfahren
- sind eine Alternative zu koagulometrischen Verfahren. - ermöglichen kinetische Untersuchungen  Endogene Thrombinbildungspotenzial.

14 Testsystematik - Phänotyp-Analytik - Funktionelle Testverfahren
- Strukturelle Testverfahren - Genotyp-Analytik - DNA-basiert - RNA-basiert

15 Antigenteste Definition: Antigenteste messen die Konzentration
und/oder die molekulare Struktur eines Analyten. Beispiele: ELISA-Verfahren Elektrophoresetechniken/Western-Blot HPLC Durchflusszytometrie

16 Sandwich-ELISA: Prinzip (1)
Fänger-Ak Mikrotiterplatte

17 Sandwich-ELISA: Prinzip (2)
Antigen Fänger-Ak Mikrotiterplatte

18 * * Sandwich-ELISA: Prinzip (3) Detektions-Ak Antigen Fänger-Ak
Mikrotiterplatte

19 * * Sandwich-ELISA: Prinzip (4) Substrat Farbstoff Detektions-Ak
Antigen Fänger-Ak Mikrotiterplatte

20 Allgemeine Aspekte - Testprinzipien - Qualitätssicherung
- Befundinterpretation

21 Testvalidität - Eignung des Tests für die klinische Diagnostik.

22 Testvalidität: Parameter
- Präzision (RiLiBÄK) - Spezifität - Sensitivität

23 Testpräzision Intra-assay Varianz: Schwankungen eines
Messwertes innerhalb einer Messserie. Inter-assay Varianz: Schwankungen eines Messwertes von Serie zu Serie.

24 Testsensitivität: Definition
Die Testsensitivität ist definiert als die Wahrscheinlichkeit mit der erkrankte Personen vom Test als krank erkannt werden.

25 Testvalidität Krankheits- Testergebnis status positiv negativ
positiv richtig positiv falsch negativ negativ falsch positiv richtig negativ

26 Testsensitivität: Definition
RP Sensitivität = RP + FN RP = richtig positiv, FN = falsch negativ

27 D-Dimer und DVT-Diagnostik
Test Sensitivität Negativer prä- (%) diktiver Wert Elisa Vidas-DD Latex-Assay Simplired Perrier A, Bounameaux. Thromb Haemost 2001; 86:

28 Testspezifität: Definition
Die Testspezifität ist definiert als die Wahrscheinlichkeit mit der gesunde Personen vom Test als nicht krank erkannt werden.

29 Testvalidität Krankheits- Testergebnis status positiv negativ
krank richtig positiv falsch negativ gesund falsch positiv richtig negativ

30 Testspezifität: Definition
RN Spezifität = RN + FP RN = richtig negativ, FN = falsch positiv

31 Testvalidität - Eignung des Tests für die klinische Diagnostik.
- Evidence-based diagnostics

32 EBD: Bewertungen Das Ergebnis des diagnostischen Verfahrens ist ...
Level 1: diagnoseentscheidend und therapierelevant. Level 2: diagnoseentscheidend oder therapierelevant. Level 3: diagnosehinführend. Level 4: zur Diagnostik und Therapie ungeeignet.

33 Qualitätssicherung: Ziele
- Erkennen von Einflüssen, die unab- hängig von dem Messparameter das Testergebnis beeinflussen. - Sicherung einer gleichbleibenden Ergebnisqualität.

34 Einflussgrößen Einflussgrößen beeinflussen das Messergebnis
unabhängig von der eigentlichen Messgröße.

35 Einflussgrößen - Physiologische Einflussgrößen
- Methodische Einflussgrößen (Analytische Störgrößen)

36 Analytische Störgrößen
- Präanalytische Fehler - In-process Fehler - Interpretationsfehler

37 Präanalytische Störgrößen
- Art der Blutabnahme - Verhältnis Blut : Antikoagulanz - Art des Antikoagulanz

38 Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz

39 Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz

40 Analytische Störgrößen: Beispiel aPTT
Präanalytische Fehler: Abnahme in Serumröhrchen Abnahme aus Heparinzugang In-process Fehler: Fehlende Zugabe von Calciumchlorid Verzicht auf Präzisionskontrollen Interpretationsfehler: Interpretation bei fehlendem Referenz- bereich

41 Physiologische Einflussgrössen
- Alter - AB0-Blutgruppe - Akute-Phase-Reaktion - Geschlecht

42 vWF-Parameter: Referenzbereiche*
Parameter Blutgruppen A/B 0 vWF-Ag: 64 – 150 % 46 – 125 % RiCof: 65 – 165 % 50 – 130 % CBA: 69 – 116 % 61 – 121 % * IHT Uniklinikum Bonn

43 Referenzintervall*: Definition
- Das Referenzintervall bildet die bio- logische Streuung eines Messpara- meters in einer definierten Popula- tion ab. - Die obere und untere Grenze des Referenzintervalls wird durch das 95% Konfidenzintervall bestimmt. * Synonym: Referenzbereich

44 Referenzgrenzen: Bewertung
X - 2s 95 % + 2s

45 Referenzwerte - Referenzstichprobe - Referenzintervall
- Referenzgrenzen

46 Referenzstichprobe: Selektion
Induktiv: Ausgewählte Population ohne Krankheits- merkmale (Blutspender, Krankenhausper- sonal) Deduktiv: Unselektierte Patienten bilden das Basis- material. Durch Ausschlusskriterien wird das Kollektiv der „nicht kranken“ ermittelt. Mathematisch: „Bhattacharya Plot“

47 Referenzstichprobe: induktiv
Population: 100 gesunde Blutspender 50 Frauen/ 50 Männer Berechnung: 95 % Konfidenzintervall* * Fast alle Hämostaseparameter sind nicht normalverteilt.

48 Referenzstichprobe: Deduktiv
Parameter: D-Dimer als Thrombose- indikator Basiskollektiv: Patienten mit thrombose- typischer Symptomatik Selektionskriterium: bildgebende Diagnostik

49 Allgemeine Aspekte - Testprinzipien - Qualitätssicherung
- Befundinterpretation

50 Transversalbeurteilung
Wert in Bezug zum Referenzintervall: - innerhalb: gesund? - außerhalb: pathologisch?

51 Entscheidungsgrenzen
- Entscheidungsgrenzen korrelieren eine klinische Symptomatik mit ein- em Messwert. - Entscheidungsgrenzen können nur an einem Kollektiv von erkrankten Personen ermittelt werden. - Entscheidungsgrenzen und Referenz- grenzen sind nicht deckungsgleich.

52 Entscheidungsgrenzen: Beispiel
Parameter: FVIII-Aktivität Referenzintervall: 60 – 150 % Entscheidungsgrenze: - Hämophilie: < 30 % - Thrombophilie: > 250 %

53 Bewertungsalgorithmus: Laboranalytik
Messwert laborinterne Qualitätskontrolle fehlerfrei ja nein Freigabe Fehlersuche ärztliche Befundung Arzt informieren Wiederholung

54 Qualitätskontrolle & Referenzintervall
Unpräzision von Tag zu Tag: - höchstens 1/8 des Referenzintervalls - besser 1/12 des Referenzintervalls Beispiel: aPTT (26 – 34 s) - 1/8  1 s - 1/12  0,7 s

55 freigegebener Messwert
Bewertungsalgorithmus: Laboranalytik freigegebener Messwert Innerhalb des Referenzbereichs ja nein Verlaufs- kontrolle Krankheits- bezug ja nein ja nein Bezug zu Vorwerten Normal- wert Klinisch- relevant Klinisch- nichtrelevant

56 Beispiel: Thrombzytenzahl
Referenzbereich: – /µL ja nein Verlaufs- kontrolle Krankheits- bezug ja nein ja nein Bezug zu Vorwerten Normal- wert Klinisch- relevant Klinisch- nichtrelevant

57 Beispiel: Thrombozytenzahl
Klinischer Verlauf: - Beginn Heparintherapie vor 5 Tagen Ausgangswert: /µl Aktueller Messwert: /µl Bewertung: V. a. relative Thrombozytopenie

58 Hämostasediagnostik - Allgemeine Aspekte - Spezielle Aspekte