Blutbank und Immunhämatologie I Serologische Grundlagen, Methoden und Besonderheiten Guido Heymann

Der ganze Aufwand wofür ? Geltende deutsche Richtlinien, TFG Um gefährliche Antikörper zu erkennen Um Probleme vorab zu erkennen: immer positive X-Probe großer Aufwand, passende Konserven zu finden

Was sind Blutgruppen? Antigene auf der Oberfläche von Blutzellen aber auch Organe, Thrombos, Leukos… Polymorphismus, Verteilung, Immunogenität Vererblichkeit (genetische Anlage)

Wer ist verantwortlich?

Was können die tun?

Wie tun sie es?

Komplementaktivierung durch Antikörper Komplementaktivierende Antikörper: IgM IgG3 IgG1

Häufigkeiten Frequenz Quotient 85% 0,11 8% 0,092 80% 0,008 29% 0,0234 85% 0,11 8% 0,092 80% 0,008 29% 0,0234 99,8% 0,00003 98% 0,0003 66% 0,0017 68% 0,0064 77% 0,00023 55% 0,00036 74% 0,000078 89% 0,000066

Eigene Daten: 1.6. – 30.10.06 AKS 5204 AKS+ 248 4,8 % Anti-D 19 0,365 % 7,661 % 0,11 Anti-K 7 0,135 % 2,823 % 0,092 Anti-c 2 0,038 % 0,806 % 0,008 Anti-E 21 0,406 % 8,468 % 0,0234 Anti-e 0 0,0003 Anti-Fy(a) 5 0,096 % 2,016 % 0,0017 Anti-C 6 0,115 % 2,419 % 0,0064 Anti-Jk(a) 3 0,058 % 1,21 % 0,00023 Anti-S 1 0,019 % 0,403 % 0,00036 Anti-Jk(b) 1 0,019 % 0,403 % 0,000078

Rationelles Vorgehen I Probe Bg bekannt? Bg bestimmen nein ja AKS aktuell? AKS nein ja nein ja weiter, wie Anforderung AKS negativ?

S1- S2- S3- EA+ 1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper - EA ist diagnosebedingt positiv (C3d, Lupus) - EA ist durch Medikamente positiv (z.B. Gelatine) 2.) Pat. hat Autoantikörper - Auto-Ak sind nur enzymsensitiv (Ansatz mit Enzym) - schwache Kälteautoantikörper (Röhrchentest bei 4°) 3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper - z.B. Jk, (M, Fy) u.a. (Vortransfusion?, Eluat) - medikamentabh. Ak (Gabe zuvor mit Abstand)

S1+/- S2+/- S3+/- EA- 1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper - Einzelantikörper (Relevanz?) oder Ak-Gemisch (Differenzierung mit größerem Panel) 2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper - Auto-Ak mit Pseudospezifität (Rhesus) - Kälteantikörper (I, HI) (Röhrchentest bei 4° mit Cordzelle) 3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper - Gelröhrchen - diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen) - Suchzelle Coombs+?! oder verkeimt

S1+ S2+ S3+ EA- 1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper - Hochfrequenzantikörper (Relevanz?) oder Ak- Gemisch (Differenzierung mit größerem Panel) 2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper - Auto-Ak (EA teilweise nur im Enzym +, mDCT) - Kälteantikörper (I, HI, H) (Röhrchentest bei 4° mit Cordzelle und A1(B)-Zellen) 3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper - Gelröhrchen - diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen) - Suchzellen verkeimt oder vermischt?!

S1+ S2+ S3+ EA+ - Gelröhrchen, Zentrifugenfehler, ausgeronnen?.... 1.) Pat. hat Auto-Antikörper - Wärmeautoantikörper (Diff. und mDCT/Eluat) - Kälteautoantikörper (Diff. Röhrchen streng bei 37° und 4°) - Ak-Mischungen (gr. Diff., Auto-Absorbtion o. WARM, Absorbtion-Elution) - medikamentabh. Ak (Medikation?, Serumdialysat) 2.) Pat. hat Allo-Antikörper mit Vortransfusion - Ak-Gemisch (s.o.) 3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper - Gelröhrchen, Zentrifugenfehler, ausgeronnen?.... - diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen) - Vorbehandlung mit sensiblen Medikamenten (Gelatine, HAES, ATG…)

aber: S1- S2- S3- EA- 1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper 2.) Ansatz wurde fehlerhaft durchgeführt - Serum verdünnt oder Plasma bei best. Ak - zu wenig Serum oder zu viel Suchzellsuspension - Verwechslung 3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper, aber: - Antigen in Suchzellen nicht vorhanden - Suchzellen sind fehlerhaft oder zu alt - HTR mit kompletter Bindung der Ak, aber Coombs- - medikamentenabh. Ak ohne aktuelle Gabe - Ak nur im Enzym nachweisbar (IgM)

Begriffsklärung Antigen/Zelle 1 2 3 4 5 6 D + - C c Fya Fyb 3 3 3 3 3 Anti-D allein Anti-D mit unterliegendem Anti-C 3 3 3 3 3 3 Anti-Fy(a) allein Anti-Fy(a) allein mit Homozygoteneffekt 3 Anti-Fy(a) im Enzym

Antithetische Antigene antithet. Ag Homozygoteneffekt Enzym D - + C c (+) E e K k ~ Kp(a) Kp(b) Jk(a) Jk(b) ++ Fy(a) Fy(b) --- Le(a) Le(b) M N S s P1

Beispiel X X X X X Weiteres Vorgehen: 4°C Ansatz im Röhrchen weitere N+ Zellen aus anderen Panels Antigenbestimmung Beispiel L/C 3 2 4 EN X X X X X ? X X X Anti-Fy(a), mgl. Anti-N

typisches Vorgehen Ansatz von auffälligem Serum mit Diff-Panel auf L/C Karte Ergebnis genau abgestuft ablesen (+/-, 1,2,3,4, MF) und übertragen Antigenausschluß nach folgendem Verfahren: ->

Antigenausschluß Sicherer Ausschluß bei negativem Ergebnis von zwei homozygoten Zellen Antigene des Patienten lassen zumindest keinen Alloantikörper zu Mäßig sicherer Ausschluß bei negativem Ergebnis mit einer homozygoten Zelle fraglicher Ausschluß bei negativem Ergebnis mit heterozygoten Zellen

Reaktionsformen Enzymsensitivität: z.B. Fy und MN(S) Reaktionssmuster: komplette Agglutination, „schlierige“ 1-2fache Reaktion, Mischfeldreaktion Nur homozygote Zellen reagieren

Ein Wort zum Titer Wie wird Titer bestimmt? homozygote, „stärkste“ Zelle gleiche Reaktionsbedingungen Ein hochtitriger Ak kann irrelevant sein – ein niedrigtitriger Ak kann relevant sein… Wann ist Titer notwendig (meine Meinung) in der Schwangerschaft zur Ak-Differenzierung (HTLA) Verlauf nach Transfusionsreaktion nach Transplantation / KMT

Z.B.: HTLA High titre – low avidity „schlierige“, mischfeldige und ungleich starke Reaktionen alle Zellen pos. Titer meist > 1:64 aber: völlig irrelevant stören X-Probe

Ak, immer relevant A und B, H bei Bombay Duffy (Fy), Kell, Kidd (Jk), Rhesus S, s, U P, PP1Pk Vel, Diego

Ak, manchmal relevant Lan, Landsteiner-Wiener (Lw) Cartwright (Yt), Cromer, Dombrock Colton, Gerbich, Scianna Junior (Jr), Indian At(a)

Ak, relevant, wenn reaktiv bei 37°C H M, N, P1 Lewis a (Le(a)) Lutheran (Lu) Sid (Sd(a)) KAK (Transfusion?)

Ak, immer irrelevant Lewis b (Le(b)) HLA (Bg(a-c)) HTLA: Chido, Rodgers, Knops, McCoy, Cost JMH(?) WAK (für Transfusion)