Ringversuch zur Qualitätssicherung in der Interphase-FISH-Diagnostik in der Tumorzytogenetik 2016 (QUITZ) www.bvdh-ringversuche.de

Organisation - Ablauf Am 04.04.2016 wurde das RV-Informationsschreiben, das RV-Anschreiben, der Einsendeschein zu der zu untersuchenden Probe sowie der Auswertebogen für die Gutachter auf die Website des BVDH gestellt und diese zur Anmeldung für den Ringversuch frei geschaltet

Organisation - Ablauf Bis zum Anmeldeschluss am 01.05.2016 hatten sich 47 Labore angemeldet (ein Labor hat sich nachträglich angemeldet) 4 Labore weniger im Vergleich zu 2015 Die Aussendung des Materials erfolgte am 31.05.2016 Insgesamt wurden 48 Proben versendet (aufgrund eines Anwenderfehlers musste 1 Probe erneut versendet werden) Alle 48 Labore haben Befunde über die Website eingereicht

Fragestellung

Bewertungskriterien

Probenmaterial Es wurden Knochenmarksproben von vier Patienten ohne Nachweis einer hämatologischen Neoplasie zur Herstellung der Ringversuchproben verwendet Das Knochenmark der ausgewählten Patienten wurde zytomorphologisch untersucht Das Knochenmark wurde nach Kurzzeitkultivierung (16h) ohne Zugabe von Colcemid nach einem Standard-Protokoll für Zytogenetik aufgearbeitet (Hypotone KCl-Lösung, Fixation mit Methanol/Eisessig 3:1)

Probenmaterial - Validierung Im MLL wurden zur Validierung Fluoreszenz in situ Hybridisierungen an peripheren Blut-Ausstrichen (Normal-Kontrolle) sowie an fixierten Knochenmarkzellen (Patientenprobe) mit Sonden zum Nachweis eines MLL(KMT2A)-Rearrangement (Abbott) durchgeführt Alle Präparate wurden von zwei Untersuchern ausgewertet In allen Präparaten fand sich kein Hinweis auf das Vorliegen eines MLL(KMT2A)-Rearrangement Außerdem wurden jeweils zwei Aliquots (Patientenprobe und Normalkontrolle) von 0,8 ml an die Labore in Kiel und Göttingen zur externen Validierung versandt

Externe Validierung Patientenprobe

Externe Validierung Normal-Kontrolle

Gutachter-Gremium RV-Leiterin: Prof. Dr. med. Claudia Haferlach, MLL - Münchner Leukämie Labor Gutachter: Dr. rer. nat. Sönke Arps, Labor Dr. Fenner & Kollegen MVZ GmbH,Hamburg Prof. Dr. med. Detlef Haase, Abteilung für Hämatologie und Onkologie, Georg-August Universität Göttingen Dr. med. Lana Harder, Institut für Tumorgenetik Nord, Kiel Prof. Dr. Jürgen Kunz, Labor Dr. Fenner & Kollegen MVZ GmbH,Hamburg Dr. rer. medic. Brigitte Mohr, Medizinische Klinik und Poliklinik 1, Zytogenetiklabor, Universitätsklinikum Dresden Dr. rer. nat. Inga Nagel, Universitätsklinikum Schleswig-Holstein, Campus Kiel, Institut für experimentelle und klinische Pharmakologie, Kiel Dr. Antje-Friederike Pelz, Tumorzytogenetisches Labor, Institut für Humangenetik Medizinische Fakultät der Otto-von-Guericke-Universität, Magdeburg Prof. Dr. med. Harald Rieder, Institut für Humangenetik, Universitätsklinikum Düsseldorf Dr. rer. nat. Elisabeth Schrörs, MVZ Dortmund Dr. Eberhard & Partner, Dortmund Dipl. Biol. Barbara Seipel, Institut für Medizinische Diagnostik GmbH, Bioscientia, Ingelheim Dipl. Biol. Friedel Wenzel, Spezialist Medizinisch-genetische Analytik FAMH, Abt. Medizinische Genetik, UKBB, Basel Dipl. Biol. Helmut Spring, Praxis für Humangenetik, Dr. Eva Schwaab, Wiesbaden

Begutachtungsprozess 28.06.2016 erste Telefonkonferenz der Gutachter zur Abstimmung der Vorgehensweise bei der Begutachtung 07.09.2016 zweite Telefonkonferenz Unklarheiten bei der Bewertung diskutiert und gemeinsame Entscheidung des Gutachtergremiums zur Bewertung getroffen Zusammenführung der Bewertung der beiden Gutachter durch die Ringversuchleiterin

Bereitstellung der Ergebnisse Teilnahmebescheinigungen am Ringversuch werden vom BVDH versandt sofern die Rechnung für die Teilnahme am Ringversuch beglichen wurde (100,00 EUR für BVDH-Mitglieder und 125,00 EUR für Nicht-Mitglieder zzgl. 19 % MwSt) Präsentation der anonymisierten Gesamt-Ergebnisse auf der BVDH Website unter „Ringversuche abgeschlossen“ Individuelle Ergebnisse sind für jedes Labor unter dem eigenen Login als Datei abrufbar

FISH Ringversuch (QUITZ) 2016 Gesamtauswertung: FISH Ringversuch 2016 Teilnehmer: 48 Maximale Punktzahl: 60 Median = 58 26 x 60 Punkte 8 x 59 Punkte 4 x 58 Punkte 2 x 57 Punkte 1 x 56 Punkte 1 x 55 Punkte 3 x 54 Punkte 2 x 53 Punkte 1 x 50 Punkte 54% 17% 8% 4% 2% 2% 6% 4% 2%

FISH Ringversuch (QUITZ) 2016 Auswertung: Bearbeitungszeit Teilnehmeranzahl: 48 Maximale Punktzahl: 4 83% 15% 2% 7-14 Tage ( 2 P) > 14 Tage (0 P) < 7 Tage (4 P)

FISH Ringversuch (QUITZ) 2016 Auswertung: Formaler Teil Teilnehmer: 48 Maximale Punktzahl: 10 1 Punkt 0 Punkte 4 Punkte 2 Punkte

FISH Ringversuch (QUITZ) 2016 48 47 1 48 35 13 47 1 Interpretation des FISH Ergebnisses in Bezug auf die Fragestellung 42 6 48 48 47 1 40 7 1 1 48

Ergebnisse Zusammenfassung 48/48 Laboren gaben richtig an, dass kein MLL- bzw. KMT2A-Rearrangement vorlag 1/48 Laboren berichtete über das Vorhandensein eines zusätzlichen MLL- bzw. KMT2A-Signals (6,5% der Kerne)

Hybridisierungseffizienz 2016 Auswertung FISH Ringversuch 2016 Hybridisierungseffizienz MLL/KMT2A Teilnehmer: 48 % Kerne ohne Signale 10% Hybridisierungseffizienz MLL/KMT2A Durch die Verwendung einer „Normalkontrolle“ zur Bestimmung der Hybridisierungseffizienz gab es dieses Jahr wie auch im Vorjahr 2015 keine großen Schwankungen.

erwartetes Ergebnis Kein Nachweis eines MLL-Rearrangements bzw. KMT2A-Rearrangements Interpretation: - Anhand des Befundes kann eine therapieassozierte AML nicht ausgeschlossen werden - Empfehlung einer Chromosomenbandenanalyse und/oder weiteren FISH-Analysen und/oder Durchführung von molekulargenetischen Untersuchungen nach ISCN 2016: nuc ish 11q23(5'KMT2A,3'KMT2A)x2(5'KMT2A con 3'KMT2Ax2)[100] oder nuc ish(5'KMT2A,3'KMT2A)x2(5'KMT2A con 3'KMT2Ax2)[100] oder nuc ish(KMT2Ax2)[100] nuc ish 11q23(5'MLL,3'MLL)x2(5'MLL con 3'MLLx2)[100] oder nuc ish(5'MLL,3'MLL)x2(5'MLL con 3'MLLx2)[100] oder nuc ish(MLLx2)[100] Auch andere Varianten aufgrund der Verwendung anderer Sonden wurden akzeptiert, sofern korrekt

Mögliche Teilnehmerzertifikate Das Labor hat erfolgreich am Ringversuch teilgenommen und die Kriterien der Rili-BÄK wurden erfüllt. Das Labor hat am Ringversuch teilgenommen und die Kriterien der Rili-BÄK wurden erfüllt. diese Teilnahmebescheinigung wurde ausgestellt, wenn ein die Ergebnisse der FISH- Analysen fachlich nicht korrekt waren Das Labor hat erfolgreich am Ringversuch teilgenommen. Die Kriterien der Rili-BÄK wurden nicht erfüllt.   Das Labor hat am Ringversuch teilgenommen. wenn beide Kriterien nicht erfüllt wurden

Ergebnis der RV Erfolgreiche Teilnahme und Kriterien der Rili-BÄK erfüllt: 48 Labore   Teilnahme und die Kriterien der Rili-BÄK erfüllt: 0 Erfolgreiche Teilnahme und Kriterien der Rili-BÄK wurden nicht erfüllt: 0 Das Labor hat am Ringversuch teilgenommen: 0

Anmerkung der Gutachter Häufige Kritikpunkte: Nicht korrekte oder fehlende ISCN-Formel Unzureichende Interpretation der Ergebnisse in Bezug auf die Fragestellung