Biotransformation of the sesquiterpene (+)-valencene by cytochrome P450cam and P450BM-3 Rebecca J. Sowden, Samina Yasmin, Nicholas H. Rees, Stephen G.

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1 Biotransformation of the sesquiterpene (+)-valencene by cytochrome P450cam and P450BM-3 Rebecca J. Sowden, Samina Yasmin, Nicholas H. Rees, Stephen G. Bell and Luet-Lok Wong* Department of Chemistry, Inorganic Chemistry Laboratory, University of Oxford, South Parks Road, Oxford, UK Received 25th August 2004, Accepted 11th October 2004 First published as an Advance Article on the web 18th November 2004

2 Gewünschte Umsetzung: ● aus Orangenöl ● Synthasegen in E.coli exprimiert ● aus Grapefruitsaft ● gefragter Duftstoff billig teuer

3 Ansatz: Biologische Oxidation von (+)-Valencene mit P450 Monooxygenase zu (+)-Nootkatone Probleme: ● (+)-Valencene kein Substrat für Wildtyp P450 ● (+)-Nootkatone inhibiert P450 ● Neben (+)-Nootkatone entstehen auch andere Produkte

4 Verwendete Enzyme: Cytochrom P450 cam Cytochrom P450 BM-3 ● aus Pseudomonas putida ● Substrat: Campher ● gut charakterisiert ● aus Bacillus megaterium ● Substrat: mittel- bis langkettige Fettsäuren ● gut charakterisiert

5 Verwendete Mutationen bei P450 cam : ● F87A: kleinere AS ● Y96F: hydrophobere AS ● V247L: schließt Substrattasche ● L244A: schafft Platz am Häm

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