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Veröffentlicht von:Georg Bleiweiss Geändert vor über 9 Jahren
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Nachweis des Proteins NHE-7 in roten Blutzellen
Seminar 1 Nachweis des Proteins NHE-7 in roten Blutzellen Claudia Hahn
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Inhalt Na+/K+-Transport Leak-Transport NHE Familie Versuchsabläufe Referenzen
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K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+
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K+ K+ H+ H+ K+ K+ K+ H+ K+ H+ K+ H+ K+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+
NHE Familie Na+
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K+ K+ K+ K+ K+ H+ K+ H+ H+ Na+ Na+-K+-Transport Na+ Na+ K+ Na+ Na+ Na+
NHE Familie Na+
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K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ Na+ Na+-K+-Transport Na+ Na+ Leak-Transport
NHE Familie Na+
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Natrium-Kalium-Pumpe 3 Natrium raus 2 Kalium rein
Na+/K+-Transport Natrium-Kalium-Pumpe 3 Natrium raus 2 Kalium rein unter ATP Verbrauch (gegen Konzentrationsgefälle)
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Leak-Transport Definition: Unidirektionaler K+ und Na+ Einfluss und Ausfluss während alle bekannten Transportwege (Pumpen, Kanäle, Carrier) inhibiert sind durch Ouabain + Bumetanide + EGTA Na+/K+ Pumpe, der Na+/K+/2Cl- Kotransport und der Ca2+-aktivierte K+ Kanal sind inhibiert Der "leak" Na+ Fluss ist komplizierter als der "leak" K+ Fluss Größere Anzahl von spezifischen Transportsystemen Der "leak" K+ und Na+ Transport kann nicht über Elektrodiffusion erklärt werden
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Transmembrane Antiporter (Na+/H+ Austauscher)
NHE Transmembrane Antiporter (Na+/H+ Austauscher) Regulieren den pH-Wert und die Ionenhomöostase Wird durch verschiedene Signalwege reguliert Hoch konserviert bei den Säugetieren Neun Isoformen NHE1 bis NHE9 9
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Struktur des Na+/H+ Austauschers
Zwölf transmembrane Segmentantiporter Im neutralen pH sind die NHEs inaktiv; Aktivierung erfolgt bei Ansäuerung Struktur des Na+/H+ Austauschers Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007
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NHE-Familie NHE 1 in nahezu allen Geweben, Zelltypen und Spezies Konstanthaltung von pH und Zellvolumen Reguliert die Proliferation Aktivierung des Na+/H--Austauschs durch intrazelluläre Säurebelastung NHE 2 vor allem im Gastrointestinaltrakt (Magen und Darm) ähnliche Aufgaben wie NHE1
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NHE 3 Beim Menschen in Niere und Dünndarm, aber auch in vielen anderen Geweben zu finden Volumenregulation NHE 4 beim Kaninchen im Magen exprimiert, mittelstark im Dünndarm und Kolon und schwach in Niere, Gehirn, Herz, Uterus, Skelettmuskel und Leber Könnte an der Volumenregulation beteiligt sein
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NHE 5 im Gehirn hoch exprimiert NHE 6 nur in den Mitochondrien, Herz, Gehirn, und Skelettmuskel pH-, Volumen- und Elektrolytregulation
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kommt im Golgi-Netzwerk, Endosomen und Plasmamembran vor
NHE-7 kommt im Golgi-Netzwerk, Endosomen und Plasmamembran vor reguliert die Ionenhomöostase Durch intrazelluläre Akkumulation von Ca-Ionen und die Bindung von Calmodulin (CaM) aktiviert (Bindung an IL2) 14
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Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007
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Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007
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NHE-8 Am proximalen Tubulus der Niere entdeckt im ER (endoplasmatisches Retikulum) und bis zum trans Golgi nachweisbar Elektrolyttransport NHE9 Im späten Endosom
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Versuchsablauf Gewinnung von Blut Isolierung der Membranproteine
Trennung der Proteine nach Größe mittels SDS-Page Anfärben über Coomassie-blau Western Blot Detektion mit Antikörpern
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Proteine roter Blutkörperchen nach der SDS-Gelektrophorese und Coomassie-Färbung
Diplomarbeit Jennifer Lang, Universität des Saarlandes
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Western Blot zum Nachweis des NHE 7 mit Antikörpern
Diplomarbeit Jennifer Lang, Universität des Saarlandes
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Ausblick Weitere Nachweise mittels verschiedener Methoden: MALDI-ToF Kapillarelektrophorese Flüssigchromatographie Polymerase-Kettenreaktion
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