Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse
Gliederung Überblick Transgene Mäuse Rückkreuzungen Keimbahn-„Knockout“-Mäuse Konditionelle „Knockout“-Mäuse Zusammenfassung
Überblick Ziel: Charakterisierung bestimmter Gene aufgrund von Genveränderungen Transgene Mäuse: zusätzliche oder veränderte Gene im Genom „knockout“ Mäuse: ein Gen wird komplett deletiert Aufteilung in Keimbahn- und konditioneller Knockout
Erstellung transgener Mäuse Übertragung der behandelten Eier in eine scheinträchtige Maus Auslösung einer Superovulation und Paarung Entnahme der befruchteten Eizelle und Injektion der DNA Integration des Gens in einige Nachkommen Quelle: Janeway
Rückkreuzungen Einschleusen der Transgene Rückkreuzung mit gewünschtem Stamm Nachkommen sind genetisch heterogen Fortgesetzte Rückkreuzung Quelle: Janeway
„Knockout“-Mäuse Gen Einbau HSV-tk an den Enden Einbau AB-Resistenz Quelle: Janeway Integration an beliebiger StelleAbtöten durch Ganciclovir Einbau an der richtigen Stelle durch homologe RekombinationResistenz Keine IntegrationAbtöten der Zelle durch AB
Züchtung „Knockout“-Mäuse Reimplantation in eine scheinträchtige Maus Transfektion von ES-Zellen mit Knockout- Konstrukt Enstehung einiger chimärer Mäuse Injektion der ES-Zellen in Blastocysten Quelle: Janeway
Konditionelle „Knockout“-Mäuse Problem: Deletion eines Gens, das fürs Überleben essentiell ist (rezessiv letales Gen) Erstellung homozygoter Tiere nicht möglich Verwendung RAG--Mäuse Nutzung Cre-loxP-System
Verwendung von RAG-defekten Mäusen RAG--Maus: keine B- und T-Zellen Injektion der ES-Zellen in RAG--Blastocyste Chimäre Maus, deren Lymphozyten von den ES-Zellen abstammen Quelle: Janeway
Cre-loxP-System Gen wird von loxP flankiert Cre-Rekombinase schneidet das Gen raus Quelle: Janeway
Zusammenfassung Transgene Mäuse: -zusätzliches oder verändertes Gen -Injektion in Eizelle, Einbau unspezifisch Knockout Mäuse: -Keimbahn: Deletion eines Gens in allen Zellen, Einbau über homologe Rekombination (AB-Resistenz, HSV-tk) -Konditionell: Gewebespezifisch oder induziert, RAG-, Cre-loxP
Vielen Dank für die Aufmerksamkeit