Nachweis des Proteins NHE-7 in roten Blutzellen Seminar 1 Nachweis des Proteins NHE-7 in roten Blutzellen Claudia Hahn 25.04.2012

Inhalt Na+/K+-Transport Leak-Transport NHE Familie Versuchsabläufe Referenzen

K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ http://3imgsrv.fotofinder.com/archive/thumbnail/EE/EE375CF1C176A17E.jpg

K+ K+ H+ H+ K+ K+ K+ H+ K+ H+ K+ H+ K+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ NHE Familie Na+ http://3imgsrv.fotofinder.com/archive/thumbnail/EE/EE375CF1C176A17E.jpg

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K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ Na+ Na+-K+-Transport Na+ Na+ Leak-Transport NHE Familie Na+ http://3imgsrv.fotofinder.com/archive/thumbnail/EE/EE375CF1C176A17E.jpg

Natrium-Kalium-Pumpe 3 Natrium raus 2 Kalium rein Na+/K+-Transport Natrium-Kalium-Pumpe 3 Natrium raus 2 Kalium rein unter ATP Verbrauch (gegen Konzentrationsgefälle) http://de.wikipedia.org/w/index.php?title=Datei:Scheme_sodium-potassium_pump-de.svg&filetimestamp=20100611205409

Leak-Transport Definition: Unidirektionaler K+ und Na+ Einfluss und Ausfluss während alle bekannten Transportwege (Pumpen, Kanäle, Carrier) inhibiert sind durch Ouabain + Bumetanide + EGTA Na+/K+ Pumpe, der Na+/K+/2Cl- Kotransport und der Ca2+-aktivierte K+ Kanal sind inhibiert Der "leak" Na+ Fluss ist komplizierter als der "leak" K+ Fluss Größere Anzahl von spezifischen Transportsystemen Der "leak" K+ und Na+ Transport kann nicht über Elektrodiffusion erklärt werden

Transmembrane Antiporter (Na+/H+ Austauscher) NHE Transmembrane Antiporter (Na+/H+ Austauscher) Regulieren den pH-Wert und die Ionenhomöostase Wird durch verschiedene Signalwege reguliert Hoch konserviert bei den Säugetieren Neun Isoformen NHE1 bis NHE9 9

Struktur des Na+/H+ Austauschers Zwölf transmembrane Segmentantiporter Im neutralen pH sind die NHEs inaktiv; Aktivierung erfolgt bei Ansäuerung Struktur des Na+/H+ Austauschers Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007

NHE-Familie NHE 1 in nahezu allen Geweben, Zelltypen und Spezies Konstanthaltung von pH und Zellvolumen Reguliert die Proliferation Aktivierung des Na+/H--Austauschs durch intrazelluläre Säurebelastung NHE 2 vor allem im Gastrointestinaltrakt (Magen und Darm) ähnliche Aufgaben wie NHE1

NHE 3 Beim Menschen in Niere und Dünndarm, aber auch in vielen anderen Geweben zu finden Volumenregulation NHE 4 beim Kaninchen im Magen exprimiert, mittelstark im Dünndarm und Kolon und schwach in Niere, Gehirn, Herz, Uterus, Skelettmuskel und Leber Könnte an der Volumenregulation beteiligt sein

NHE 5 im Gehirn hoch exprimiert NHE 6 nur in den Mitochondrien, Herz, Gehirn, und Skelettmuskel pH-, Volumen- und Elektrolytregulation

kommt im Golgi-Netzwerk, Endosomen und Plasmamembran vor NHE-7 kommt im Golgi-Netzwerk, Endosomen und Plasmamembran vor reguliert die Ionenhomöostase Durch intrazelluläre Akkumulation von Ca-Ionen und die Bindung von Calmodulin (CaM) aktiviert (Bindung an IL2) 14

Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007

Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007

NHE-8 Am proximalen Tubulus der Niere entdeckt im ER (endoplasmatisches Retikulum) und bis zum trans Golgi nachweisbar Elektrolyttransport NHE9 Im späten Endosom

Versuchsablauf Gewinnung von Blut Isolierung der Membranproteine Trennung der Proteine nach Größe mittels SDS-Page Anfärben über Coomassie-blau Western Blot Detektion mit Antikörpern

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Proteine roter Blutkörperchen nach der SDS-Gelektrophorese und Coomassie-Färbung Diplomarbeit Jennifer Lang, Universität des Saarlandes

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Western Blot zum Nachweis des NHE 7 mit Antikörpern Diplomarbeit Jennifer Lang, Universität des Saarlandes

Ausblick Weitere Nachweise mittels verschiedener Methoden: MALDI-ToF Kapillarelektrophorese Flüssigchromatographie Polymerase-Kettenreaktion

Referenzen Attaphitaya S, Park K and Melvin JE. Molecular cloning and functional expression of a rat Na+/H+ exchanger (NHE5) highly expressed in brain. J Biol Chem 274: 4383-4388, 1999. Baird NR, Orlowski J, Szabo EZ, Zaun HC, Schultheis PJ, Menon AG and Shull GE. Molecular cloning, genomic organization, and functional expression of Na+/H+ exchanger isoform 5 (NHE5) from human brain. J Biol Chem 274: 4377-4382, 1999. Bookstein C, DePaoli AM, Xie Y, Niu P, Musch MW, Rao MC and Chang EB. Na+/H+ exchangers, NHE-1 and NHE-3, of rat intestine. Expression and localization. J Clin Invest 93: 106-113, 1994. Bookstein C, Musch MW, DePaoli A, Xie Y, Rabenau K, Villereal M, Rao MC and Chang EB. Characterization of the rat Na+/H+ exchanger isoform NHE4 and localization in rat hippocampus. Am J Physiol 271: C1629-38, 1996. Goyal S, Vanden Heuvel G and Aronson PS. Renal expression of novel Na+/H+ exchanger isoform NHE8. Am J Physiol 284: F467-F473, 2003.

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Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit

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