Einfluss konjugierter Linolsäuren auf das bovine Immunsystem TP7 CLA-meeting 28.10.2009 Jamal Hussen Mirja Koy Hans-Joachim Schuberth University of Veterinary Medicine Hannover, Germany

Aktuelle Ergebnisse TP7 'Schlachtversuch' Absolute Zahlen leukozytärer Subpopulationen im Blut In-Vitro-Analysen CLA: & die Proliferation lymphozytärer Zellen CLA & die Apoptose lymphozytärer Zellen Direkte und indirekte Effekte von CLA auf bovine PMN Apoptose Phagozytose Modulierte Expression von Zytokinen und Chemokinen in PMN (Vorversuche) Jamal Hussen CLA-meeting 28.10.2009 Mirja Koy

Erkenntnis aus dem Basisversuch: CLA-100 senkt den Anteil an CD4+ T-Zellen Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009 CLA-Zufütterung Absetzen von CLA

Absolute Quantifizierung im 'Schlachtversuch' Leukozyten Granulozyten Mononukleäre Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009 Monozyten γδ-T-Zellen CD8+ Zellen

Absolute Quantifizierung im 'Schlachtversuch' CLA reduziert die absolute Anzahl von T-Helfer Zellen und B-Zellen CD4+ T-Zellen B-Zellen Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009 Serum-IgG1 Serum-IgG2

CLA-Einfluss in vivo auf Leukozyten in der Peripherie CLA hat keinen Einfluss auf die Zahl Von Granulozyten Monozyten, γδ T-Zellen, CD8+ T-Zellen CLA reduziert die Zahl von CD4+ T-Zellen von B-Zellen Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009

Proliferationsmodulation durch CLA TCR-Abhängige Stimulation (SEA) TCR-unbhängige Stimulation (ConA) Prinzipieller Ansatz Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009 Kontrolle Stimulus Zyten Blasten Durchfluss- zytometrische Messung

Trans10-cis12-CLA hemmt die Proliferation boviner MNC Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009

Cis9-trans11-CLA hemmt die Proliferation boviner MNC Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009

Apoptose-Analytik Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009 vitale necrotisch apoptotisch vitale Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009 vitale apoptotische

Cis9-trans11-CLA verstärkt die Aktivierungsabhängige Apoptose-Induktion von MNCs In-vitro Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009

Zusammenfassung CLA hemmt die Proliferation boviner MNC TCR-abhängige (SEA) > TCR-unabhängige (ConA) Beide Isomere zeigen identische Wirkung Cis9-t11-CLA (50 µmol/L) wirkt proapoptotisch auf stimulierte MNC in vitro Jamal Hussen, CLA-meeting 28.10.2009

CLA und die Apoptose von polymorphkernigen Granuloyzten MNC Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009 nG nG ? ? Es stellt sich für uns nun die Frage, ob und wie CLA das Absterbeverhalten von PMN in vitro beeinflusst. Wir haben, was das Absterbeverhalten betrifft, die Phagozytoseleistung und PMN-Apoptose betrachtet. Und dazu gibt es zwei generelle Herangehensweisen. Erstens, wenn CLA das Absterbeverhalten von PMN moduliert, ist dieser Effekt direkt; das heisst wirkt CLA direkt auf die Apoptose oder die Phagozytoseleistung in PMN ein…. Direkte Effekte Indirekte Effekte

Indirekte Effekte von CLA auf PMN Beeinflusst CLA das Absterbeverhalten von Neutrophilen in Anwesenheit aktivierter boviner MNC? Hypothese CLA-Isomere führen zur (oder hemmen) die Stimulations-abhängige Sekretion von Mediatoren in lymphoiden und myeloiden Zellen Einfluß auf Überlebensrate und funktionelle Kapazitäten (Phagozytose) neutrophiler Granulozyten Vorwissen: SEA-Stimulation MNC/PMN-Kokulturen schnelleres Absterben von PMN Beruht auf löslichen Faktoren (nicht identifiziert) Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009 nG Oder ist der Einfluss von CLA indirekter Natur. Man weiß, dass PMN in stimulierten PMN-MNC-Cokluturen ein schnelleres Absterbeverhalten haben als in vitro allein kultiviert. Die löslichen Faktoren, die dabei eine Rolle spielen sind bis dato nicht charakterisiert. Der zweite Ansatz ist demnach, ob der CLA-Einfluss indirekt ist, indem CLA das Mediatorspektrum der MNC beeinflusst, welches wiederum eine Veränderung der PMN mit sich zieht. CLA

CLA moduliert nicht die PMN-Apoptose Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009 PMN + MNC-Kokulturen Unstimul. SEA-stimul. PMN + MNC-Überstände Unstimul. MNC SEA-stimul. MNC - - 10 50 - - 10 50 - 10 50 - - 10 50 - 10 50 CLA [µmol/L]

CLA hat keinen Einfluss auf die Zahl vitaler PMN Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009

Warum polymorphkernige neutrophile Granulozyten (PMN)? 'Schlachtversuch' CLA-Supplementation ändert nicht die PMN-Zahl im Blut 'Basis-versuch' (Jamal Hussen) CLA-Supplementation fördert die PMN-Phagozytoseleistung Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009 Unterdem ersten Aspekt wurde die Reproduktionsimmunologie lange Zeit ausschließlich gesehen. Wie sich jedoch zeigt wirken Mechanismen oder Faktoren des Immunsystems gleichwohl entscheidend auf den Erhalt der Trächtigkeit aus. Kurzgefasst: ohne Immunsystem, ohne bestimmte Zellen des Immunsystems keine erfolgreiche Trächtigkeit. Diese beiden Punkte möchte ich kurz nacheinander beleuchten. Z-Tl. greifen sie auch ineinander über Bakt./PMN = 100/1

CLA beeinflusst nicht die Phagozytoseleistung von PMN in vitro Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009 Wie Jamal vorhin berichtet hat, verändert CLA die Anzahl der neutrophilen Granulozyten im peripheren Blut nicht. Mit den aus Braunschweig erhaltenen Blutproben wurde ein weiterer Versuch durchgeführt, der die Aufnahme von Bakterien durch PMN dokumentiert. Ex vivo wurde ermittelt, dass die Granulozyten mit CLA gefütteter Tiere eine gesteigerte Aufnahme an Bakterien hatten. Anhand dieses Vorwissen, konnten wir die Versuche mit PMN in vitro folgendermaßen angehen.

Ergebnisse die Phagozytoseleistung in vitro wird durch das CLA-Isomer cis-9, trans-11 nicht beeinflusst aber die Phagozytoseleistung ex vivo wird nach CLA-Supplementation in PMN gesteigert die Mechanismen sind unbekannt Höhere Fc-Rezeptorexpression? Veränderte Genexpression der PMN in vivo? Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009

Modulierte Expression von Zytokinen und Chemokinen in PMN Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009 Exemplarisch zwei Gene vorstellen: CCL3 und IL-8 CCL3 S100A12 CXCL8 (IL-8) IL-1ß TNF-a (PPAR-g)

CCL3-Expression in unstimulierten und stimulierten PMN (qRT-PCR, 3 h) Niedrige Basis-Expression Responder Hohe Basis-Expression Non-Responder Mirja Koy, CLA-meeting 28.10.2009 CLA-Einfluß?