Techniken Mikroskopie, Gewebeaufschluß und Färbung

Präsentation zum Thema: "Techniken Mikroskopie, Gewebeaufschluß und Färbung"—  Präsentation transkript:

1 Techniken Mikroskopie, Gewebeaufschluß und Färbung
D-Praktikum Anatomie der Pflanzen Marcus Koch, Christoph Dobeš HIP, Abteilung Biodiversität und Pflanzensystematik

2 LICHTMIKROSKOPIE Köhlersche Beleuchtungsanordnung
Prinzip der konjugierten Ebenen Homogene Ausleuchtung der Präparateebene Keine Abbildung von Teilen der Mikroskopoptik in der Bildebene Einstellbarkeit der Apertur über die Kondensorblende Vermeidung von Streulicht (s.u.) durch Regulierbarkeit der Leuchtfeldfläche

3 LICHTMIKROSKOPIE weitere Verfahren der Beleuchtung
Kritische Beleuchtungsanordnung Projektion einer Mattscheibe in die Nähe der Objektebene Kontrasterhöhung Dunkelfeld Phasenkontrast Interferenzkontrast Färbungen

4 Materialauswahl Bewußte Auswahl des Objektes hinsichtlich
Materialauswahl Bewußte Auswahl des Objektes hinsichtlich taxonomischer, phylogenetischer Zugehörigkeit Wahl des pflanzlichen Organes oder Gewebes Entwicklungszustand (Ontogenie) Schnittebene bzw. Perspektive der Betrachtung

5 Gewebeaufschluß Erzielen eines dünnen (mikroskopierbaren) Präparates Schnittpräparat – Herstellung mittels Rasierklinge oder Mikrotom Quetschpräparat – gängige Methode für zytologische Untersuchungen

6 Gewebeaufschluß Matzerationspräparat – Zytologie, Holzanatomie Zupf- und Schabepräparat – z.B. Indument Aufhellungspräparat – ungeschnittene Pflanzenteile oder dicke Schnitte Esau 1960

7 Färbung – von Organellen, Zellwand, Ein- und Auflagerungen, Speicherstoffen Ziel: spezifischer Nachweis und Kontrastierung Zellkomponente Farbstoff Anwendungsbeispiele Zellkerne Karminessigsäure Chromosomenzählung Zellulose Astrablau, Anilinblau Lage und Struktur nicht verholzter Gewebe Lignin Safranin Phloroglucin-Salzsäure Lage von Gefäßbündel, Xylem Suberin, Kutin, Wachse, Fette, Öle Sudan III sekundäre Abschlußgewebe, Kutikula. Caspari, Öltröpfchen Kallose Resorcinblau Anilinblau Einlagerung in den Siebplatten Pektin Rutheniumrot Methylenblau (Vitalfarbstoff) Anfärben der Mittellamelle Stärke Lugolsche Lösung Nachweis von Speicherstoffeinlagerungen

8 Färbung Safranin-Astrablau Kontrastfärbung von verholzten und unverholzten Zellwänden

9 Färbung Phloroglucin spezifische Anfärbung von Lignin, d. h
Färbung Phloroglucin spezifische Anfärbung von Lignin, d.h. von verholzten Geweben ethanolische Phloroglucinlösung + HCl

10 Färbung Sudan III Fette, Öle, Suberin, Wachse, Kutin

11 Färbung Karminessigsäure Schnellfärbung von Zellkernen (Chromatin) kurzes, schonendes Aufkochen des Gewebes in KE

12 Einbettung Objektträger und 0,17 mm Deckglas Medien für die Einbettung: Wasser - Standardmedium Ethanol – luftreiches Gewebe Glycerin – Dauerpräparat, chemisch hydrophobe Objekte Kanadabalsam, Euparal – Dauerpräparat Zuckerlösung – Plasmolyse

13 Dokumentation Zeichnung Dauerpräparat
Objekt: Taxon, Organ Name des Verfassers Schnittrichtung Datum Färbemethode Vergrößerung, Maßstab Überblicks- und Detailzeichnung Objekt: Taxon, Organ Name des Verfassers Datum Färbemethode

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