Techniken Mikroskopie, Gewebeaufschluß und Färbung D-Praktikum Anatomie der Pflanzen Marcus Koch, Christoph Dobeš HIP, Abteilung Biodiversität und Pflanzensystematik

LICHTMIKROSKOPIE Köhlersche Beleuchtungsanordnung Prinzip der konjugierten Ebenen Homogene Ausleuchtung der Präparateebene Keine Abbildung von Teilen der Mikroskopoptik in der Bildebene Einstellbarkeit der Apertur über die Kondensorblende Vermeidung von Streulicht (s.u.) durch Regulierbarkeit der Leuchtfeldfläche http://www.mikroskopie.de/kurse/koehlertheorie.htm

LICHTMIKROSKOPIE weitere Verfahren der Beleuchtung Kritische Beleuchtungsanordnung Projektion einer Mattscheibe in die Nähe der Objektebene Kontrasterhöhung Dunkelfeld Phasenkontrast Interferenzkontrast Färbungen http://www.mikroskopie-fuer-anfaenger.de/index.shtml

Materialauswahl Bewußte Auswahl des Objektes hinsichtlich Materialauswahl Bewußte Auswahl des Objektes hinsichtlich taxonomischer, phylogenetischer Zugehörigkeit Wahl des pflanzlichen Organes oder Gewebes Entwicklungszustand (Ontogenie) Schnittebene bzw. Perspektive der Betrachtung http://www.puc.edu/Faculty/Gilbert_Muth/art0059.jpg

Gewebeaufschluß Erzielen eines dünnen (mikroskopierbaren) Präparates Schnittpräparat – Herstellung mittels Rasierklinge oder Mikrotom Quetschpräparat – gängige Methode für zytologische Untersuchungen

Gewebeaufschluß Matzerationspräparat – Zytologie, Holzanatomie Zupf- und Schabepräparat – z.B. Indument Aufhellungspräparat – ungeschnittene Pflanzenteile oder dicke Schnitte Esau 1960

Färbung – von Organellen, Zellwand, Ein- und Auflagerungen, Speicherstoffen Ziel: spezifischer Nachweis und Kontrastierung Zellkomponente Farbstoff Anwendungsbeispiele Zellkerne Karminessigsäure Chromosomenzählung Zellulose Astrablau, Anilinblau Lage und Struktur nicht verholzter Gewebe Lignin Safranin Phloroglucin-Salzsäure Lage von Gefäßbündel, Xylem Suberin, Kutin, Wachse, Fette, Öle Sudan III sekundäre Abschlußgewebe, Kutikula. Caspari, Öltröpfchen Kallose Resorcinblau Anilinblau Einlagerung in den Siebplatten Pektin Rutheniumrot Methylenblau (Vitalfarbstoff) Anfärben der Mittellamelle Stärke Lugolsche Lösung Nachweis von Speicherstoffeinlagerungen

Färbung Safranin-Astrablau Kontrastfärbung von verholzten und unverholzten Zellwänden

Färbung Phloroglucin spezifische Anfärbung von Lignin, d. h Färbung Phloroglucin spezifische Anfärbung von Lignin, d.h. von verholzten Geweben ethanolische Phloroglucinlösung + HCl

Färbung Sudan III Fette, Öle, Suberin, Wachse, Kutin

Färbung Karminessigsäure Schnellfärbung von Zellkernen (Chromatin) kurzes, schonendes Aufkochen des Gewebes in KE

Einbettung Objektträger und 0,17 mm Deckglas Medien für die Einbettung: Wasser - Standardmedium Ethanol – luftreiches Gewebe Glycerin – Dauerpräparat, chemisch hydrophobe Objekte Kanadabalsam, Euparal – Dauerpräparat Zuckerlösung – Plasmolyse

Dokumentation Zeichnung Dauerpräparat Objekt: Taxon, Organ Name des Verfassers Schnittrichtung Datum Färbemethode Vergrößerung, Maßstab Überblicks- und Detailzeichnung Objekt: Taxon, Organ Name des Verfassers Datum Färbemethode

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