Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 Transformation Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 Gliederung 1.Einleitung 2.Was ist ein Plasmid? 3. Klonierung 3.1. Was ist Transformation? 4. Klonierung des lacZ-Gens 5.Versuchsanleitung 6.Versuchsauswertung 7.Quellen Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 2.Was ist ein Plasmid? Plasmide werden als Vektoren bezeichnet Extrachromosomal, autonom replizierende, doppelsträngige, ringförmige DNA-Moleküle Verleiht dem Bakterium verschiedene Eigenschaften (Resistenz gegen Antibiotika) Kodieren für eine Reihe von Merkmalen Von einem Plasmid gibt es mehrere 100 Kopien pro Zelle Bakterien geben Plasmide weiter Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 Plasmide dienen der Einführung von DNA in eine fremde Zelle Wichtige Bereiche des Plasmids: Replikations-Sequenz, Antibiotika-Resistenz-Gen, Klonierungs-Stelle Es gibt drei Formen, Plasmide nach der Isolierung nachzuweisen: superhelikase, relaxiert, linearisiert Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

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Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 3. Klonierung Zentraler Schritt: Einführung von DNA-Molekülen in Bakterien Bakterien können DNA nur in begrenztem Umfang aufnehmen Zellen werden physikalisch und/oder chemisch behandelt dadurch können sie besser DNA aufnehmen Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 Methode funktioniert nur, wenn Bakterienzellen einer sehr frühen Wachstumsphase benutzt werden Bakterien werden nach einer solchen Behandlung als kompetent bezeichnet Herstellung kompetenter Zellen: unter Zugabe von Calciumchlorid wird die Zellwand durchlässig (kompetent) DNA kann aufgenommen werden Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

3.1. Was ist Transformation? Aufnahme von DNA in Zellen Einige der Bakterien nehmen DNA auf, wenn man DNA und kompetente Bakterien mischt Danach plattiert man die Bakterien auf ein selektives Medium, das die Erkennung von rekombinanter Klonen erlaubt Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

4. Klonierung des lacZ-Gens Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 5. Versuchsanleitung Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

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Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 6. Versuchsauswertung Selektion (Auslese): es werden Plasmide verwendet, die ein zu klonierendes Gen und mehrere Selektionsmarker tragen ( z.B. Resistenzgen für bestimmte Antibiotika) Ohne Selektion können nicht transformierte Bakterien auf dem Nährboden wachsen Mit Selektion können nur transformierte Bakterien auf dem Nährboden wachsen Auszählung der Kolonien und Berechnung der Transformationsrate Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007 7. Quellen Blue Genes, Fonds der chemischen Industrie XLAB, Göttinger Experimentallabor für junge Leute e.V., Dr. Eva Corinna Feil Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007

Vielen Dank für eure Aufmerksamkeit Pia, Sarah, Lisa Biologie Lk 16.03.2007