Mikrobiologie-Praktikum Mittwoch 18.04.2007 -Enterobacteriaceen -Escherichia coli -Lactobacillen

Elektiv- und Selektivmedien Selektivmedien: -selektieren definierte nicht allzu grosse Mikroorganismengruppen. -Zusammensetzung ist so gewählt, dass nur einer gleichen Gruppe von Organismen gute Wachstumsbedingungen geboten werden. -enthalten in der Regel Hemmstoffe (Beispiele: VRB, VRBD) Elektivmedien: -nicht-selektive Nährböden, die zur Züchtung vieler, nicht miteinander verwandten Arten dienen, deren gemeinsames Merkmal eine bestimmte biochemische Stoffwechselleistung ist. -Elektivstoffe sind zusätze, die nur von Organismen mit einer gewissen Biochemischen Eigenschaft verwendet werden können (Beispiele: Lecithinase-, Casein-Agar)

7.4.2 Enterobacteriaceen (EB) ►Bedeutung & Vorkommen: -Familie: gram-negativ, fakultativ anaerobe Stäbchen →viele phatogene Arten wie Salmonellen, Shigellen, enteropathogene E. coli u.a. Vorkommen: Weit verbreitet, im Boden, Gewässer, Darm oder auf Planzen !EB werden bei mikrobiologischen Untersuchungen genutzt, um auf Fäkalkontamination hinzuweisen. EB zeigen als Indikatorenorganismen die Mögliche verunreinigung einer Probe mit Fäkalien an! ► Selektivnachweis: Medium: VRBD (Kristallviolett/Neutralrotn/Galle/Glucose/Agar) →Selektivsubstanzen (Kristallviolett/Galle) hemmen weitgehend die gram-positive Begleitflora. →Die Fermentation der Kohlenhydrate (Glucose & Lactose) ist anhand eines Indikatorumschlages (Neutralrot) ersichtlich. →Die Ausfällung der Gallensalze zeigt sich anhand eines Präzipitathofes. Verfahren: Gussplattenverfahren mit Deckschicht Auswertung: EB bilden rotviolette Kolonien mit Präzipitatbof Bebrütungsbedingungen: 24h @ 37°C

7.4.2 Enterobacteriaceen (EB) Kontrolle Reinkultur: Ab dem Agar werden verdächtige Kolonien abgeimpft und ein verdünnungsausstrich gemacht. Medium: TSA Verfahren: Verdünnungsausstrich Bebrütungsbedingungen: 1Tag @ 37°C Auswertung: O/F-Test

7.4.3 Escherichia coli (EC) ► Bedeutung: Familie: Enterobacteriaceen (eine Art innerhalb der Gattung Escherichia → Dient ebenfalls als nachweis einer möglichen Fäkalkontamination. ► Selektivnachweis: Medium: TBX-Agar (Tryptone Bile X Glucuronide-Agar) → Gallensalze unterdrücken das Wachstum gram-positiver & vieler gram-negativer MO → EC spaltet spezifisch den Ester der Glucuronsäure ; es bilded sich ein blauer Farbstoff Verfahren: - Gussplattenverfahren (GP) - Membranfiltertechnik (MF) Bebrütungsbedingungen: - GP: 18-24h @ 44±1°C (aerob) - MF: 18-24h @ 44±1°C (aerob) Auswertung: Als EC gelten alle blau gefärbten Kolonien

7.4.6 Lactobacillen (LB) ► Bedeutung & Vorkommen: Familie: Lactobacteriaceae (Milchsäurebakterien) → morphologisch uneinheitliche Gruppe von Bakterien → Sind anaerob bis aerotolerant, können aber trotz eies Katalase-Mangels auch in gegenwart von Luftsauerstoff wachsen. Vorkommen: auf Pflanzen, in Milch und deren Folgeprodukt, Schleimhäuten ► Selektivnachweis: Medium: MRS-Agar (Lactobacillus-Agar nach de Man, Rogosa und Sharpe) → Wachstum der Lactobacillen wird durch versch. Substanzen wie Polysorbat, Acetat, Magnesium und Mangahn gefördert. → wegen Mangel an Selektivsubstanzen können auch andere Arten (Pediococcus-, Leuconostoc-Arten), weitere Milchsäurebakterien wachsen. Verfahren: Gussplattenverfahren Bebrütungsbedingungen:72h @ 37°C unter anaeroben Bedingungen (90%N2 & 10%CO2) Auswertung: alle gewachsenen Kolonien gelten als Lactobacillen, ausser sog. pin-point-Kolonien (Fremdkeime) Bestätigung: mit Mikroskop; Stäbcheförmige oder Kokkenartige Zellen