VORLESUNG V DIE UNTERSUCHUNG VON LYMPHOCYTEN I. Lymphocyten lassen sich aus Blut, lymphatischen Organen, Epithelien und aus Entzündungsherden isolieren II. Spezifische Antikörper gegen Zelloberflächen-Moleküle für Aufreinigung und Charakterisierung von Lymphozyten III. Wachstum von Lymphozyten mit polyklonalen Mitogenen oder spezifischen Antigenen IV. Messung von T-Zell-Effektorfunktionen V. Klonierung von homogenen T-Zell-Linien VI. Zusammenfassung

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation

Mononukleäre Zellen des peripheren Blutes lassen sich aus Gesamtblut durch Zentrifugation isolieren

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie

Durchflußcytometrie ermöglicht die Identifizierung und Quantifizierung von Zellen aufgrund ihrer Oberflächeantigene

Die Verteilung von Lymphozytensubpopulationen im peripheren Blut des Menschen

Die relative Verteilung lymphozytischer Subpopulationen in verschiedenen Geweben

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten Tetramerfärbung METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten Tetramerfärbung

Schematic representation of a fluorescent MHC class I/peptide tetramer

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten Tetramerfärbung 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten Tetramerfärbung 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper

Subpopulationen von Lymphocyten lassen sich durch an paramagnetische Partikel gekoppelte Antikörper auftrennen

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten Tetramerfärbung 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen Durchflußcytometrie 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten Tetramerfärbung 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA)

Messung der Antikörperproduktion mit Hilfe eines ELISA

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation

Die antigenspezifische T-Zell-Proliferation als Test für T-Zell-Antworten

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation II. Produktion von Cytokinen A. ELISA B. ELISPOT METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation II. Produktion von Cytokinen A. ELISA B. ELISPOT

Cytokine produktion by CD4 + and CD8 + cells

Messung der Produktion von IL-2 mit Hilfe eines ELISA

Messung der Produktion Cytokinen mit Hilfe eines ELISPOT

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation II. Produktion von Cytokinen A. ELISA B. ELISPOT III. Abtöten von Zielzellen A. Chromfreisetzung aus markierten Zielzellen B. Markierung von Zielzellen mit Fluoreszenz (CFSE) METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation II. Produktion von Cytokinen A. ELISA B. ELISPOT III. Abtöten von Zielzellen A. Chromfreisetzung aus markierten Zielzellen B. Markierung von Zielzellen mit Fluoreszenz (CFSE)

Messung der Aktivität cytotoxischer T-Zellen anhand der Chromfreisetzung aus markierten Zielzellen

METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation II. Produktion von Cytokinen A. ELISA B. ELISPOT III. Abtöten von Zielzellen A. Chromfreisetzung aus markierten Zielzellen B. Markierung von Zielzellen mit Fluoreszenz (CFSE) 7. Generierung antigenspezifischer T-Zellen METHODEN 1. Reinigung von Lymphocyten mit Hilfe des Dichtegradientzentrifugation 2. Identifizierung und Quantifizierung von Lymphocyten aufgrund ihrer Oberflächenantigenen (Durchflußcytometrie) 3. Quantifizierung von antigenspezifischen Lymphocyten (Tetramerfärbung) 4. Anreicherung von Lymphocyten I. Fluoreszenzaktivierten Zellsorter (FACS) II. Magnetische Partikel (Beads) gekoppelte Antikörper 5. Messung von B-Zell-Funktionen I. Antikörperproduktion (ELISA) 6. Messung von T-Zell-Funktionen I. Antigenspezifische Proliferation II. Produktion von Cytokinen A. ELISA B. ELISPOT III. Abtöten von Zielzellen A. Chromfreisetzung aus markierten Zielzellen B. Markierung von Zielzellen mit Fluoreszenz (CFSE) 7. Generierung antigenspezifischer T-Zellen

Klonierung von T-Zell-Linien

ZUSAMMENFASSUNG 1. Die zelluläre Basis der adaptiven Immunität ist die klonale Selektion Lymphocyten durch Antigene. Daher ist die Isolierung der Lymphocyten erforderlich 2. Lymphocyten lassen sich durch Antikörper, die Moleküle an der Zelloberfläche erkennen, in Subpopulationen unterteilen 3. Physikalische Auftrennung der Lymphocyten mit Hilfe magnetischer Partikel oder mittels einer fluoreszenzaktivierten Zellseparation gestattet eine quantitative Analyse der Zellverteilung 4. Die Zellfunktionen der isolierten Populationen lassen sich in vitro und in vivo untersuchen ZUSAMMENFASSUNG 1. Die zelluläre Basis der adaptiven Immunität ist die klonale Selektion Lymphocyten durch Antigene. Daher ist die Isolierung der Lymphocyten erforderlich 2. Lymphocyten lassen sich durch Antikörper, die Moleküle an der Zelloberfläche erkennen, in Subpopulationen unterteilen 3. Physikalische Auftrennung der Lymphocyten mit Hilfe magnetischer Partikel oder mittels einer fluoreszenzaktivierten Zellseparation gestattet eine quantitative Analyse der Zellverteilung 4. Die Zellfunktionen der isolierten Populationen lassen sich in vitro und in vivo untersuchen