Klinikum Nürnberg Einsatz der Cliquid™ Drug Screen & Quant S oftware in der toxikologischen Analytik - erste Erfahrungen - F. Degel Institut für Klinische Chemie Zentrallabor Institut für Klinische Chemie Zentrallabor Klinikum Nürnberg Klinikum Nürnberg

Cliquid™ Drug Screen & Quant Benutzerfreundliche Oberfläche Benutzerfreundliche Oberfläche  Analyst-Software im Hintergrund  Vereinfachtes 4-stufiges Arbeitsschema zur Methodenerstellung und Probenbearbeitung  Sichere Benutzerverwaltung, abgestufte Berechtigung Vorgefertigte Screening und Quantifizierungsmethoden Vorgefertigte Screening und Quantifizierungsmethoden  Direkt abrufbar, großenteils selbsterklärend Einfache Einbindung selbsterstellter Methoden Einfache Einbindung selbsterstellter Methoden  Offenes System

Cliquid™ Drug Screen & Quant Massenspektrenbibliothek für Drogen, Pharmazeutika und –Metaboliten Massenspektrenbibliothek für Drogen, Pharmazeutika und –Metaboliten Neuer, automatischer Suchalgorismus Neuer, automatischer Suchalgorismus  Suche nach Spektren und Retentionszeit MRM-Katalog mit über 1200 Substanzen MRM-Katalog mit über 1200 Substanzen  Leichte Erstellung neuer quant. Methoden Individuelle Reporterstellung über vorgefertigte Reportmodelle Individuelle Reporterstellung über vorgefertigte Reportmodelle

Hybridsystem Triple-Quad LC/MS/MS / Ion Trap

MS/MS - Bedingungen Experiment 1 (MRM Übersichts-Scan) Experiment 1 (MRM Übersichts-Scan)  MRM – Übergänge (bis zu 300 Paare)  Polarität: positiv  Ionenquelle: Turbo Ion Spray  Dwell time: 5 ms  CE: 20 / 35 / 50 eV, bzw CES 35 ± 15 eV

IDA Experiment  First Criterium: Select the first intense peaks which exceed 1000 cps  Mass Tolerance: 0.25 amu  Exclude former target ions for 15 seconds after 4 occurences  Exclude isotopes within 1.0 amu window  Use Enhanced Resolution Scan to confirm charge state and /or isotope pattern  Exclude 1+ precursors from Enhanced Resolution Scan  Experiment 2 (Enhanced Product Ion Scan, EPI) Polarity: positivePolarity: positive Scan rate: 4000 amu/secScan rate: 4000 amu/sec Q0 Trapping: YesQ0 Trapping: Yes LIT Fill Time: 50 msLIT Fill Time: 50 ms CE: 35 eVCE: 35 eV CES : 35 eV ± 15 eVCES : 35 eV ± 15 eV

TIC- Chromatogramm MRM-Übergang EPI-Scan CE 20 eV EPI-Scan CE 35 eV EPI-Scan CE 50 eV IDA-Experiment

Home-page der cliquid Software Startseite der Cliquid - Software

Vorgefertigte Quantifizierungsmethoden Eigene Quantifizierungsmethoden Quantifizierungsmethoden

Suchergebnis und Quantifizierung Benzodiazepin- Methode, Kontrolle Qualitätskontrollprobe Benzodiazepine

Peak-Review Peak Review

Suchergebnis und Quantifizierung Serumprobe Fallnummer 4555, Serumprobe

Drugscreening Methoden 4 Methoden für Drugscreening

Suchkriterien Einstellung der Bibliotheksuche, Suchparameter

Automatische Datenbanksuche in Cliquid Automatische Datenbanksuche in Cliquid, 3 CE Methode Suche erfolgt durch Abgleich der einzelnen Massenspektren

Automatische Datenbanksuche in Cliquid, CES Methode Fragmente aller drei CE´s werden getrappt + gemeinsam ausgescannt

Methodenerstellung aus mrm- Katalog Einfache Methodenerstellung in cliquid Übernahme eigener Methoden aus Analyst Methodenaufbau mit Substanzen aus MRM-Katalog, (derzeit 1262 Einträge)

TIC- Chromatogramm MRM-Übergang EPI-Scan CE 20 eV EPI-Scan CE 35 eV EPI-Scan CE 50 eV IDA-Experiment Manuelle Suche in Analyst

Bibliotheksuche Doxepin Datenbanksuche, Ergebnis : Doxepin bei CE = 35

Bibliotheksuche Diazepam Datenbanksuche, Ergebnis : Diazepam bei CE = 35

Datenbanksuche, Ergebnis : Metformin bei CE = 20

Methodenvergleich mit GC/MS-general unknown (I) Substanz GC/MS *) LLExtraktion Cliquid Urin LLExtraktion Cliquid Serum 1+5 ACN Cliquid Urin 1+5 ACN Toxi 3723 Metoclopramidpospospospos CarbamazepinposposØpos Toxi 3705 Citaloprampospos/pos HydrocortisonØpos/Ø Metoclopramidpospos/pos QuetiapinØpos/Ø Toxi 3749 Diphenhydraminpospos/pos Promethiazin + Mb pospospospos Toxi 3704 HydrocortisonØposposØ AmiodaronØposØØ *) LL Extraktion nach Toxi-Lab™

Methodenvergleich mit GC/MS-general unknown (II) Substanz GC/MS *) LLExtraktion Cliquid Urin LLExtraktion Cliquid Serum 1+5 ACN Cliquid Urin 1+5 ACN Toxi 3704 MorphinposposØpos FlunitrazepamposØpospos FentanylposposØpos Diazepam + Mb pospospospos NaloxonØposØpos Toxi 3136 RisperidonØpospospos 9-OH-RisperidonØpospospos Toxi 2284 MetforminØpospospos Doxepinpospospospos *) LL Extraktion nach Toxi-Lab™

Methodenvergleich mit GC/MS general unknown (25 Fälle)

Methodenvergleich mit GC/MS-general unknown (exemplarisch: 25 Tox-Fälle) Ergebnisse völlig kongruent (4) Ergebnisse völlig kongruent (4) Ergebnisse divergent (3) Ergebnisse divergent (3) Ergebnisse komplementär (18) Ergebnisse komplementär (18) Multitarget-Screening =#= General unknown Screening Sehr gute Ergänzung beider Methoden LC/MS-MS meist nachweisempfindlicher Datenbanken bei GC/MS deutlich größer (NIST05: Vb)

Resumee Cliquid™ Drug Screen & Quant Software Vorteile Vorteile  Benutzerfreundlich  Einfache Quantifizierung  Offenes System  Massenspektrenbibliothek  Automatisierte Suche  Umfangreicher MRM- Katalog Nachteile  Absolute Retentionszeiten, keine Retentionsindices  Kein direktes „Switchen“ zu Analyst möglich  Kein „Snapshot“  Derzeit noch Beschränkung auf 300 Substanzen /Lauf => Verbesserung in Analyst 1.5 durch „scheduled MRM“ Algorythmus

Frau Dipl.Chem. (FH) Andrea Hanenberg danke ich für die geschickte technische Unterstützung bei der Durchführung der Untersuchungen.