GLYKOPROTEINE Vorkommen und Nachweise

Präsentation zum Thema: "GLYKOPROTEINE Vorkommen und Nachweise"—  Präsentation transkript:

1 GLYKOPROTEINE Vorkommen und Nachweise
Viet-Cuong Pham-Huy, Biochemie

2 Was ist eigentlich ein Glykoprotein?
Kovalente Bindung mit Oligo- saccharidketten (Glykan) → Glykosylierte Proteine. Kohlenhydratkette: bis zu 30 Resten, Massenanteil bis zu 80% der Gesamtmasse.

3 Oligosaccharidkette Aus mehreren verschiedenen Monosacchariden (einschließlich Aminozuckern). Linear oder verzweigt, je nach Bindungen.

4 8 häufigst vorkommende Zucker bei Glykoprotein

5 Oligosaccharidkette Aus mehreren verschiedenen Monosacchariden (einschließlich Aminozuckern). Linear oder verzweigt, je nach Bindungen. Verknüpfungstyp: O-gekoppelte (über Ser/Thr) vs. N-gekoppelte Oligosaccharide (über Asn). O-gekoppeltes Oligosaccarid N-gekoppeltes Oligosaccarid

6 Wo kommen Glykoproteine vor?
Membranprotein (AB0-Blutgruppensystem). Extrazelluläre Matrix (Proteoglykan). Strukturprotein (Peptidoglykan - bakterielle Zellwand). Antikörper. Hormone (Follikel stimulierendes Hormon - FSH). etc.

7 AB0-Blutgruppensystem
Antigen auf Oberfläche des Erythrozyts → N- oder O-gekoppelte Oligosaccharide. Kernstruktur: H-Antigen aus Kombinationen von Gal, Fuc, GlcNAc und NeuNAc. → Gruppe 0. Gruppe A/B: H-Antigen + GalNAc/Gal-Rest über eine α-(1￫3)-glykosidische Bindung.

8 Vergleich der Strukturen von H-, A- und B-Antigen

9 Proteoglykan Struktur des Proteoglykans in der extrazellulären Matrix

10 Wie lässt sich ein Glykoprotein nachweisen?
Periodic acid-Schiff (Perjodsäure-Schiff - PAS)-Reaktion. Affinitätsbasierte Verfahren: + Saccharidebindungsproteine. + Enzym/Antikörpergekoppelte Methoden.

11 PAS-Reaktion SDS-Gel mit Perjodsäure und Schiff’schem Reagenz behandelt. Vicinales Diol oxidiert durch Perjodsäure → Aldehydgruppen → Reaktion mit Schiff’schem Reagenz → Purpur-rote Färbung.

12 PAS-Färbung Mechanismus

13 Saccharidbindungsproteine
Lectin: Mono- und Oligosaccharide bindendes Protein. → Lectin-Blotting: Western Blot ähnlich: + Proteine vom SDS-Gel auf Blotmembran transferiert. + Mit Lectin und einem Label, z.B. Biotin inkubiert. + 2. Inkubation mit dem enzymgekoppelten Sekundär- antikörper → Chemilumineszenz.

14 Lectin Blotting Mechanismus

15 Literatur Purves, Savada, Orians, Heller (2004): Life The Science of Biology. 7th Edition. Courier Companies Inc. H. Robert, A. Moran, G. Scrimgeour, D. Perry, D. Rawn (2008): Biochemie. 4. Auflage. Pearson. Letzter Zugriff:

16 Vielen Dank fürs Zuhören!