Supplemental Material Role of λ5 in B Cell Development Kitamura et al. 1992 Supplemental Material

Homologe Rekombination Wildtype Zielgen Deletions- vektor Neo TKHSV Rekombi- nierter Lokus Neo

Acyclovir (Zovirax®) Wirkungsmechanismus Struktur Acyclovir, ein Purinanalog, hat hohe Affinität zu viraler TK Acyclovir wird durch Thymidinkinase phos- phoryliert und als Nukleotidanalog in DNA eingebaut DNA Elongation wird terminiert

Selektion gegen zufällige Integration Zielgen Zufällige, partielle Insertion des Vektors Homologe Rekombination Neo TKHSV Neo Neo TK Zufällige Insertion des gesamten Vektors Neo+ TKHSV- Neo+ TKHSV- Neo TKHSV Neo+ TKHSV+

Homologe Rekombination Wildtype Zielgen Deletions- vektor Neo Rekombi- nierter Lokus Neo

Konstruktion des λ5 Deletions-Vektor Wildtyp- Lokus „Promoter“-Deletion Kloniertes Fragment Vektor neo „Neo“- Insertion neo Deletions- vektor

Homologe Rekombination Wildtyp- Lokus Deletions- vektor neo Deletierter Lokus neo PCR

Knockout Mäuse Blastozyteninjektion

Chimäre Mäuse Chimäre Agouti-Maus Main Entry: agou·ti Pronunciation: &-'gü-tE Function: noun Etymology: French, from Spanish agutí, from Tupi Date: 1625 1 : any of a genus (Dasyprocta) of tropical American rodents about the size of a rabbit 2 : a grizzled color of fur resulting from the barring of each hair in several alternate dark and light bands Chimäre Agouti-Maus

Southernblotanalyse von Maus-DNA EcoRI EcoRI EcoRI EcoRI EcoRI 10.2 7.5 2.5 neo Sonden 1 2 1 2

Von der chimären zur hetero- und homozygoten Knockout-Maus C57Bl6 Rag2-/- F1 (nicht nach Mendel) Rag2-/- Rag2-/- Rag2-/-

Oberflächenmarker zur Bestimmung des Differenzierungsstadiums IgD IgM B220 V  J D  JH VH  DJH Stamm-zelle Frühe Pro-B- Zelle Späte Pro-B- Zelle Späte Prä-B- Zelle Unreife B-Zelle Reife B-Zelle Frühe Prä-B- Zelle Große Zellen Kleine Zellen

Lymphozyten in Blut und Milz +/+ -/+ -/- Blut Milz Milz Milz

B-lymphoide Zellen im Knochenmark

Analyse der λ5-KO-Maus Wolfgang Schuh (Jäck Lab)

µ Bedeutung des Prä-B-Zellrezeptor für die Entwicklung B-lymphoider Vorläuferzellen Igb-/- µm-/- l5-/- VpreB-/- µDys-/- JH-/- ) RAG-/- Prä-BZR IgM IgM IgD µ Stamm- Prä-Pro- Pro- Frühe Prä- Späte Prä- Unreife Reife Plasma- Zelle B-Zelle B-Zelle B-Zelle B-Zelle B-Zelle B-Zelle zelle D  JH VH  DJH VL  JL CD19 c-kit CD25 B220 (CD45)

BM Bl/6 WT Rag2 KO l5 KO (7weeks) C-kit CD19 25,13 6.97 10,4 14,17 0,09 7,56 CD25 CD19 27,37 2,2 8,7 CD19 IgM

Spleen Bl/6 WT Rag2 KO l5 KO(7weeks) 47,7 0,1 16,6 CD19 IgM CD4 CD8

Serum-Ig

Humorale Immunantwort T-unabhängig T-abhängig

B-lymphoide Zelle im Peritoneum

Allelausschluss -/- +/+ Methode: Photoimmunfluoreszenz

Iso-, Allo- Idiotypic Markers Durch Immunisieren z.B. eines Kaninchens mit gereinigtem Maus-IgM aus einer weißen Maus = BALB/c wird die Produktion folgender Kaninchen-Antikörper induziert. BALB/c (μa) C57Bl/6 (μb) Anti-allotypische AK (gegen ein bestimmtes Epitop In C-Region) Anti-isotypische AK (gegen Epitope in C-Regionen der H- und L-Kette) Anti-idiotypische AK (gegen Epitope in V-Regionen der H- und L-Kette)

? ? ? Initiierung von Prä-B-Zellrezeptorsignalen?? Ligand cytoplasm Konstitutiv vom ER Konstitutiv von der Zelloberfläche Liganden induziert Ligand ? ? cytoplasm ? cytoplasm cytoplasm ER ER ER