Wie kann ein Vektor optimiert werden? Rekombinante Proteinsynthese in Prokaryoten 07.06.2019 Clara Morweiser

Übersicht rekombinante Synthese [Abb.1]

Zielgen Ribosomale Bindungsstelle Stabilität der mRNS Erhöhung A und T Anteil um RBS Abstand von Start-Codon CA-Multimere zwischen RBS und Start-Codon [Abb.2] Regulatorische Proteine erhöhen durch Anlagerung an mRNA die Halbweärtszeit RNAse defiziente Stämme sind schwierig in der Anzucht Stabilität der mRNS Bildung von Haarnadelstrukturen am Ende Regulatorische Proteine RNAse defiziente Stämme

Zielgen Stopp-Codon Start-Codon Tetranukleotid UAAU „ribosome skipping“ [Abb.2] Regulatorische Proteine erhöhen durch Anlagerung an mRNA die Halbweärtszeit RNAse defiziente Stämme sind schwierig in der Anzucht Start-Codon AUG

Codon-Präferenz 53% 3% [Abb.3]

Codon-Präferenz (2) [Abb.4] [Abb.5]

Vielen Dank für eure Aufmerksamkeit! Zusammenfassend… Vielen Dank für eure Aufmerksamkeit! [Abb.6] Zielgen Ribosomalen Bindungsstelle Start/Stopp-Cod Codon-Präferenz Einsatz veränderter Organismen mRNA Stabilität

Abbildungsverzeichnis Science Bridge e.V G. Hannig, S. C. Makrides. Strategies for optimizing heterologous protein expression in Escherichia coli. Trends in biotechnology 16.2,1998, S. 54-60. https://www.abiweb.de/assets/courses/img/original-abituraufgabe-biologie- neurobiologie-zytologie-evolution-oekologie/Screen_shot_2013-01- 13_at_09.11.38.png N. A. Burgess-Brown et al. Codon optimization can improve expression of human genes in Escherichia coli: A multi-gene study. Protein expression and purification, 59.1 2008, S.94-102. [Fig. 2 ] N. A. Burgess-Brown et al. Codon optimization can improve expression of human genes in Escherichia coli: A multi-gene study. Protein expression and purification, 59.1 2008, S.94-102. [Fig. 4 ] https://www.giantmicrobes.com/us/media/catalog/product/cache/2/small_im age/9df78eab33525d08d6e5fb8d27136e95/e/c/ecoli-zoom.jpg

Literatur K.H. Friehs, Maßnahmen zur Verbesserung der Produktion von rekombinanten Proteinen und Plasmid DNS. Bielefeld, 1999 A. Garten, Vorlesung: Proteinexpression (VL Proteinbiochemie). Leipzig 2019 N. A. Burgess-Brown et al. Codon optimization can improve expression of human genes in Escherichia coli: A multi-gene study. Protein expression and purification, 59.1 2008, S.94-102. G. Hannig, S. C. Makrides. Strategies for optimizing heterologous protein expression in Escherichia coli. Trends in biotechnology 16.2,1998, S. 54-60. J. Martin-Farmer, G.R. Janssen. A downstream CA repeat sequence increases translation from leadered and unleadered mRNA in Escherichia coli. Molecular microbiology 31.4, 1999, S. 1025-1038