Die Präsentation wird geladen. Bitte warten

Die Präsentation wird geladen. Bitte warten

Eidgenössisches Volkswirtschaftsdepartement EVD Forschungsanstalt Agroscope Liebefeld-Posieux ALP VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – 05.06.08.

Ähnliche Präsentationen


Präsentation zum Thema: "Eidgenössisches Volkswirtschaftsdepartement EVD Forschungsanstalt Agroscope Liebefeld-Posieux ALP VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – 05.06.08."—  Präsentation transkript:

1 Eidgenössisches Volkswirtschaftsdepartement EVD Forschungsanstalt Agroscope Liebefeld-Posieux ALP VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann VTEC in Rohmilchkäse – was nun? 5. Juni 2008 Jörg Hummerjohann, Dr. sc.nat.

2 2 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Ausgangslage 2 Chargenrückrufe in D wegen VTEC in Schweizer Halbhartkäse (Schnittkäse) aus Rohmilch innerhalb 6 Monaten Keine Krankheitsfälle bekannt Normale E. coli nicht nachweisbar Kein VTEC-Kriterium in EU VO 2078/ Einträge im EU-Schnellwarnsystem RASFF 40 t Ware (inkl. Hartkäse) blockiert bei Grenzkontrollen nach Österreich

3 3 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Inhalt VTEC: Einführung zu den Keimen, ihrer Pathogenität & ihrem Vorkommen in Lebensmitteln Diverse VTEC-Nachweis-Methoden Lebensmittelrechl. Beurteilungen und Differenzen im europäischen Vollzug Konsequenzen für Rohmilchkäse-Produktion Aktivitäten der Forschungsanstalt ALP

4 4 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Wichtige Referenzen CRL VTEC: EFSA Journal (2007) 579, 1-61 Monitoring of VTEC and identification of human pathogenic VTEC types: Scientific opinion of the panel on biological hazards Kaper et al. (2004), Nature Rev. 2: Karch et al. (2005), IJMM 295, Bülte & Goll (2006): Escherichia coli und Shigellen, Behrs Verlag, Hamburg

5 5 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Pathogene E. coli: Begriffsverwirrung STEC VTEC EPEC EHEC ETEC DAEC MNEC UPEC EAEC O157:H7 O26:H11 O136:H16 EIEC stx1- & stx2+ eae-Gen

6 6 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Verotoxin-bildende E. coli (VTEC = STEC) + Toxin VT1 = Shiga-like toxin (Stx1) & VT2 (Stx2) aus: Caprioli (2006) Verozellen-Kultur

7 7 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann EHEC sind eine spezielle Untergruppe der VTEC/STEC Aus: Caprioli, CRL VTEC (2006)

8 8 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann EHEC binden durch Intimin/Tir an Darmepithelzellen und setzen Stx frei Aus :

9 9 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Eigenschaften von E. coli O157:H7 - Prototyp der EHEC- hochpathogen; verursacht Ausbrüche seit 1982 jährliche Inzidenz aller EHEC-Erkrankungen: ca. 1.4/ Einw. [Salmonella: 82/100000; RKI 2006] infektöse Dosis <100 Keime resistent gegenüber Säure und Einfrieren Glucuronidase-negativ (negativ auf TBX-Agar!) Spiking-Experimente: überlebt in streichfähiger Rohwurst und in Rohmilchkäse (Stiebing, 2000; Reitsma, 1996) Achtung: Punkte gelten nicht automatisch für alle VTEC

10 10 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Aus: Caprioli (2006)

11 11 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Gene für Intimin, Rezeptor und Sekretionssystem sind auf der LEE- Pathogenitätsinsel lokalisiert Aus: Caprioli (2006)

12 12 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Aus: Caprioli (2006)

13 13 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Verlauf EHEC-Erkrankung Aus : Gyles (2007) und RKI (2008) Inkubationszeit: 2-10 Tage Mehrzahl: wässriger Durchfall 10-20%: HC* 5-10%: HUS* oder TTP* Letalität HUS: 2% Auch Symptomlosigkeit! *HC = hämorrhagische Colitis HUS = hämolytisch-urämisches Syndrom TTP = thrombotisch-trombocytopenische Purpura

14 14 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Aus: Caprioli (2006)

15 15 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Verteilung v. VTEC O157 und non-O157 in EU Aus EFSA (2007)

16 16 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Symptome bei O157- und non-0157 Fällen & Rangliste der Serotypen bei HUS

17 17 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Einteilung in Seropathotypen nach Karmali: Basis für Risikobeurteilung durch EFSA und für CEN-Norm Detection of VTEC in food O157 u.a. : es gibt auch nicht-toxigene Isolate O26: H11 (stx1+ & eae+) => oft nur milder Durchfall O26: H11 (stx2+ & eae+) => oft HUS O91:H21 => Obwohl eae-negativ HC/HUS möglich => Nie Serotypisierung ohne stx- und eae-Bestimmung

18 18 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Einteilung in Seropathotypen: Suche nach dem einen (?) magic predictive marker alternative Einteilung nach stx2-Varianten (Scheutz & Strockbine, 2005; Friedrich, 2002) => Serotypen-unabhängig Screening nach neuen Pathogenitätsfaktoren, mittels Genomics z.B. Karmali (2003), Coombes (2008) Seropathotypen-Konzept (EFSA, 2007): wertvoll noch zu verfeinern Zurzeit nicht möglich, humanpathogene VTEC vollständig zu definieren

19 19 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann VTEC: Reservoire & Transmissionsrouten Aus: Gyles (2007) Auf Farmen und in Schlachthöfen wimmelt es von diversen VTEC in Faeces, in Umgebungsproben, auf Schlachtkörpern Rinder scheiden VTEC symptomlos aus Bis ca. 40% der Rinderkotproben positiv; O157 in CH nicht dominant (Bülte & Goll, 2006; Fremaux et al. 2006)

20 20 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Beispiele für VTEC-Ausbrüche Oktober 2007 (www.ecoliblog.com): 30 Personen erkrankt in 8 US-Bundesstaaten, 0 Tote Rückruf von 9000 t gefrorenen, rohen Hamburgern Fabrik geschlossen (81 Pers. entlassen)

21 21 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann VTEC-Ausbrüche durch Rohmilchkäse seltener als bei Fleischprodukten klassische EHEC dominieren Käsetyp & Umstände leider oft unklar Tendenz: Frisch/Weichkäse

22 22 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Fallkontrollstudie sporadischer VTEC- Erkrankungen in D: Werber et al Fälle (Median: 2.5 J.); 5 Fälle mit HUS (3x O157); 85% VTEC non-O157 Risikofaktoren für Kinder < 3 J.: Kontakt zu Wiederkäuern, wichtigster Faktor (OR=9.3) Spielen im Sandkasten (OR = 2.6) Konsum von Rohmilch (OR = 6.9; einziges Lebensmittel) Risikofaktoren für Kinder zwischen 3 und 9 J. Spielen im Sandkasten (OR = 9.0) Privates Baden in Seen, Planschbecken etc (OR = 3.8) Risikofaktoren für Personen >10 J. Konsum von Lammfleisch (OR = 14.1) Konsum streichfähiger Rohwürste (OR = 3.2) Schlussfolgerungen: Direkte Übertragung durch Lebensmittel spielt für Kinder <3 J. (grösstes Risiko für VTEC-Infektion und HUS) eine geringe Rolle Grosses Potenzial für Prävention (Händewaschen, kontr. Tierkontakt, Lm etc.)

23 23 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Epidem. Daten zu EHEC in CH, : Beobachtungen (Baumgartner & Schmid, 2008): Auslandsreise (62.7% der Fälle mit bekanntem Aufenthaltsort) Wohnen in ländlicher Umgebung Fäkal-kontaminiertes Trinkwasser 24 HUS-Fälle im Sommer 2003: Badegewässer etc. HUS durch ungenügend erhitztes Fleisch & Genuss von Rohmilch Empfehlungen zur Prävention: Keine Rohmilch trinken (Rohmilch gilt in CH als nicht genussfertig) Regeln zum Umgang mit rohem Fleisch beachten gute individuelle Hygiene, bes. auf Auslandsreisen Personen mit Durchfall dürfen keine Lebensmittel zubereiten

24 24 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Bestimmung von VTEC in Lebensmitteln (D) 25g Lm & Anreicherung & Ausplattierung stx-PCR Koloniehybridisierung Isolat: biochem. BestätigungKein Isolat +- nach: § 64 LFGB, L :2002 für Hackfleisch & Umgebungsproben auch: § 64 LFGB, L :2006 (DIN 10118:2004) für alle Lebensmittel, mit Toxinnachweis & Immunoblot Vorteil: detektiert Virulenzfaktoren unabhängig vom Serotyp Nachteile: z.T. sehr niedrige Isolationsraten; Gene Toxine Achtung: Toxinnachweis mit induzierten Kolonien und nicht direkt im Käse wie bei SET + VTEC nicht nachweisbarVTEC nachweisbar

25 25 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann VTEC-Nachweis in Milch und Milchprodukten i.d.R. seltener als bei Fleischprodukten Stephan, 2007: nur Seropathotypen C-E, keine eae+ - Stämme, v.a. Produkte aus Hofverarbeitung & Alpkäsereien, aber auch aus Gewerbe * PCR-Nachweis ohne Keim-Isolierung

26 26 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Differenzen zwischen VTEC-Isolaten aus Lebensmitteln und Patienten starke Heterogenität & versch. Serotypen in 1 Probe; häufig Zugehörigkeit zu den Seropathotypen C-E VTEC von HUS-Patienten (n=6) können auch mehr zytotoxisch als bovine Isolate von ident. Serotyp sein (Pradel et al, 2000) Nur 1.8% EHEC O26, O103, O157 in Lebensmittel, dagegen dominant in STEC-infizierten Patienten und eae-Gen in ca. 90% der HUS-Isolate (v.a. Kinder) und 5% der Lebensmittelisolate (Bülte & Goll, 2006; Beutin et al 2007) Ca. 50% der Isolate mit stx2/stx2d (davon 83% in Rindfleischproben) und Serotypen mit bekannten human-pathogenen Stämmen, zeigen Pathogenitätspotenzial auf, auch in Rohmilch (Beutin et al. 2007) Bestätigt Werber et al (2007): Lebensmittelübertragung spielt für Kinder <3J eine begrenzte Rolle und (Rind-)Fleischprodukte sind am kritischsten

27 27 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Differenzen zwischen VTEC-Isolaten aus Lebensmitteln und Patienten Serogruppenzugehörigkeit & Virulenzaustattung zeigen Unterschiede zu humanen EHEC-Stämmen, typische EHEC werden selten isoliert (Pradel et al. 2000; Bülte, 2001; Beutin et al 2007) Hypothese (Bülte & Goll, 2006): Auch wenn bislang nicht sicher bekannt ist, welche Eigenschaften einen VTEC- Stamm humanpathogen werden lassen, […] ist nur eine Subpopulation der VTEC als potenziell humanpathogen anzusehen

28 28 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann VTEC-Methoden und Lebensmittelkontrolle (übrige EU) Umfrage während CEN/TC275/WG6 Food microbiology Meeting in , Helsinki

29 29 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Differenzen zwischen VTEC-Methoden und Resultat-Interpretation: (1) Frankreich Aus: Perelle et al, 2007 (afssa-Methode, nicht im Vollzug eingesetzt)

30 30 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Differenzen zwischen VTEC-Methoden und Resultat-Interpretation: (2) Deutschland 25g Lm & Anreicherung & Ausplattierung stx-PCR Weitere Charakterisierung: RKI Koloniehybridisierung Isolat: biochem. BestätigungKein Isolat Chargenrückzug +- nach: § 64 LFGB, L :2002 für Hackfleisch & Umgebungsproben auch: § 64 LFGB, L :2006 (DIN 10118:2004) für alle Lebensmittel, mit Toxinnachweis & Immunoblot Potentieller EHEC Keine Beanstandung

31 31 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Begründung & Ablaufschema Rückruf alle VTEC = potentielle EHEC (BgVV 2001) Probe unsicher und geeignet, die Gesundheit zu schädigen Art. 14 Abs 1, 2a und 6 der VO (EG) Nr. 178/2002 Chargenrückzug => Möglichkeit zur Gegenanalyse falls ungenügend => Chargenrückruf Eintrag in europ. Schnellwarnsystem (RASFF)

32 32 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Beispiel Schnittkäse-Isolat, welches im April 08 zum Rückruf führte Serotyp: O136:H16 => Macht dieser Keim krank? Pathogenitätsfaktoren: stx1:- stx2:+=> stx2 kann mit HC/HUS assoziiert sein eae: -=> Kein klassischer EHEC e-hly: - Bovines Isolat, noch nie aus Patienten mit Durchfall oder HUS isoliert (Blanco et al, 2004; Midgley et al, 1999) Seropathotyp 5 (bislang ohne Hinweis auf Humanpathogenität)

33 33 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Entwurf: VTEC-Referenzmethode der EU CEN/WG6 Projektleitung: S. Morabito (IT, CRL VTEC) und J. Boel (DK) Prinzip von Perelle et al (2007) übernommen, Änderungen: Anreicherung mit Novobiocin alles mit real-time PCR: (1) stx & eae; (2) Seropathotypen A & B offen für neue EHEC (Beachtung der Populationsdynamik)

34 34 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Entwurf: VTEC-Referenzmethode der EU Mögliche Resultatangaben (ohne lebensmittlrechtl. Interpretation): Verbindliche lebensmittlrechtliche Interpretation würde dann in einem neuen mikrobiol. Kriterium der VO (EG) 2073 erscheinen.

35 35 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Wichtige Aussagen von EU-Gremien zu VTEC: (1) SCVPH (2003) Verwirrende Terminologie zur Definition humanpathogener VTEC führt Interpretations-Schwierigkeiten bei Prüfberichten Nur ein kleiner Teil aller VTEC-Isolate aus Tieren, Lebensmitteln und Umwelt ist humanpathogen Analyse auf VTEC O157 führt wahrscheinlich nicht zu einer bedeutenden Verringerung des Risikos für den Verbraucher Mikrobiolog. Leitlinien zu Verringerung der Fäkalkontamination entlang Lebensmittelkette könnten dazu beitragen Lm-Kategorien: rohes Rindfleisch, Hackfleisch, Rindfleischerzeugnisse, Rohmilch und Rohmilcherzeugnisse, Frischerzeugnisse bzw. Rohkost (bes. Sprossen & nicht-past. Säfte) Aus: Hatakka, 2006

36 36 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Wichtige Aussagen von EU-Gremien zu VTEC: (2) EFSA (2006) Vollständige Definition humanpathogener VTEC z. Zt. nicht möglich Konzept Seropathotypen wichtig für zukünftiges Risk Assessment; Konsensus der Definition suchen (CRL VTEC u.a.) Hauptvirulenzfaktoren : stx1, stx2, stx2c, eae (kein Konsens zu Charakt.) qualitative & quantitative VTEC-Standards sollten entwickelt werden Gute Hygiene Praxis (Schlachthöfe & Lm-Produktion) ist effektivste Methode zur Veringerung dess VTEC-Gesundheitsrisikos. Indikatoren: Enterobacteriaceae & normale E. coli ausserdem: Anwendung effizienter validierter HACCP-Prozeduren Monitoring: starten mit O157, dann weitere wichtige Serogruppen

37 37 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Massnahmen zu VTEC in der CH Runder Tisch bei ALP: Treffen von Gesundheitsbehörde, Kant. Vollzug, Käseexporteur, Käseproduzent, Milchwirtschaftl. Berater, Labor-Fachleute offenes Gesprächsklima VTEC als Krankheitserreger ist sehr ernst zu nehmen Epid. Impact in CH durch Rohmilchkäse z.Zt. nicht relevant vorerst keine Änderung der Mikr. Kriterien & Lm-Kontrolle bei Ausbruch nachweislich durch Rohmilchkäse: evtl. Revision VTEC-Monitoring beibehalten Betriebliche Massnahmen treffen

38 38 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Massnahmen zu VTEC in der CH Sensibilisierung der Käseproduzenten eingeleitet Betriebs-Analysen Produktspez. Analysen (Hhk A Hhk B) Massnahmen getroffen Miteinbezug der Rohmilchproduzenten sehr wichtig Vollzug bedauert, dass die Tolerenzwerte für E. coli in Käse wegen neuer HyV (Anpassung an 2073/2005) nun fehlen: 1000 KBE/g in Halbhartkäse 10 KBE/g in (Extra)Hartkäse

39 39 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Halbhartkäse-Technologie führt zu keiner sicheren Abtötung von Pathogenen (bekannt) Listeria monocytogene s Hartkäse (log cfu / ml, g) Hartkäse Halbhartkäse Halbhartkäse (log cfu / ml, g) MilchBruch Käse nach1 d7 d30 d60 d90 d Brennen S. aureus Staphylococcu s aureus E. coli Salmonellen Bachmann, 1995

40 40 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Stufenkontrollen in 2 Halbhartkäse- herstellenden Betrieben auf E. coli Betrieb C: Daten fehlen Wichtigkeit Kessimilchqualität & des Prozesshygiene-Monitorings

41 41 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Was macht die Forschungsanstalt ALP bzgl. VTEC? Sensibilisierung der Branche: Information an Verband der gewerblichen Käsereien über VTEC und vorbeugende Massnahmen gegen VTEC in der Käsefabrikation (E.Jakob):

42 42 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Was macht die Forschungsanstalt ALP bzgl. VTEC? Runden Tisch von Behörden & Praxis weiter pflegen Angebot VTEC-Analytik für Milchbranche: z.Zt. VTEC-Schnellmethode Duopath (Merck) Ziel: EU-Referenzmethode VTEC Durchführung Intensivmonitoring (E coli, VTEC, etc) Plan: Versuchskäse, Überleben von VTEC in Halbhartkäse Labor Spiez (Armee; Biohazard-Problematik) Vergleich VTEC-Isolate aus Käse & O157 Beratung betroffener Betriebe & Weiterbildung Regionalberater Modellrechnungen (risk assessment) Symposium Mikr. Qualität von Rohmilchkäse (www.safeconsortium.org)

43 43 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Zusammenfassung und Ausblick Definition humanpathogener VTEC ist schwierig Die Mehrzahl der Lebensmittel-Isolate gehören nicht zu den klassischen EHEC (Seropathotypen A & B), sondern zu den Seropathotypen C – E (nicht-humanpathogen über leichtem Durchfall bis HC/HUS) Einfluss auf verwendete Methoden, Resultat-Interpretation und und lebensmittelrechtliche Beurteilung (bleibt schwierig) mehr Forschung ist notwendig, um Pathogenitätsdifferenzen v.a. der Seropathotypen C-E zu erklären (Marker, Säureresistenz, etc) Konzept der Seropathotypen von EFSA (2007) prinzipiell anerkannt und Basis für kommende EU-Referenzmethode für VTEC Einheitlicher lebensmittelrechtlicher Vollzug auf Basis der kommenden CEN-Norm und eines noch zu definierenden mikrobiol. Kriteriums VTEC wäre grundsätzlich möglich und ist erstrebenswert

44 44 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Zusammenfassung und Ausblick Rohmilchkäse kann zu VTEC-Erkrankungen führen Der epidemiologische Impact dieser Kategorie spielt im Ggs. zu anderen Lebensmitteln (Rohmilch; Fleischprodukte) und anderen Übertragungsvehikeln eine begrenzte Rolle (bes. für die HUS-anfälligen Kleinkinder) Milchlieferanten und Käseproduzenten müssen dennoch VTEC sehr ernst nehmen und sich kontinuierlich um eine hohe Qualität der Rohmilch und der Produktionsabläufe bemühen Die Forschungsanstalt ALP leistet ihre Beiträge dazu

45 45 VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – J. Hummerjohann Zum Schluss ein persönliches Statement und


Herunterladen ppt "Eidgenössisches Volkswirtschaftsdepartement EVD Forschungsanstalt Agroscope Liebefeld-Posieux ALP VTEC in Rohmilchkäse | Interlab-Kongress, München – 05.06.08."

Ähnliche Präsentationen


Google-Anzeigen