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Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der DGKL 24. September in Tutzing Steffen Liedtke, Dionex GmbH, Idstein.

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1 Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der DGKL 24. September in Tutzing Steffen Liedtke, Dionex GmbH, Idstein

2 Die Herausforderung

3 Das Problem

4 S/N = nL/min S/N = 11.0 mL/min SensitivityFlow rateColumn i.d. [4.6 mm] [75 µm] Die Lösung

5 2. Probenvorbereitung: Gemäß GLP für HPLC! Zentrifugieren Online Clean-Up 3. Totvolumina: Sind tatsächlich tödlich! 4. MS-Interfacing: Hardware (+), Software (+/-). Die Praxis 1.Lösungsmittel und Additive: Nur beste Qualitäten nutzen! 5. Stoff- & Volumenüberladung: Vermeiden durch “Preconcentration”! Peak-Verbreiterung Schlechte Trennleistung 6. Säulenauswahl: (Fast) alles geht! MS-Kompatibilität Robustheit & Geschwindigkeit 7. Automatisierung: MDLC!

6 Extra-Column Dispersion

7 Void Volume Due to Bad Connections

8 Separation of a 500 fmol tryptic digest of -galactosidase with preconcentration. The data shown are for a system without (upper trace) and with (lower trace) void volume and are a comparison of MS base peak chromatograms (BPC). Because of the void volume and mixing effects, the signals for hydrophilic peptides are lost. From Mitulovic et al., Pitfalls of Preconcentration Techniques

9 Special Issue Paper An improved method for tracking and reducing the void volume in nano HPLC–MS with micro trapping columns Goran Mitulović, Marek Smoluch, Jean-Pierre Chervet, Ines Steinmacher, Andreas Kungl, Karl Mechtler Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2003 Die “Bibel”

10 Preconcentration Column Set-up Trap Column 300 µm i.d. x 5 mm Capillary Column 75 µm i.d. x 150 mm Gradient 200 nL/min

11 Eksigent Waters Dionex Agilent State-of-the-Art Nano LC Systems

12 Advanced Column Switching Technologies Automated Offline 2D-LC

13 “It is all a matter of mass transfer and column permeability” (C. Huber) PS-DVB (Silica) particlesPS-DVB monolith

14 Danke für Ihre Aufmerksamkeit!


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