Präsentation: Synthese von PHB (Polyhydroxybutyrat)

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1 Präsentation: Synthese von PHB (Polyhydroxybutyrat)
Evreux meeting

2 Inhalte der Lösungen Lösung A Lösung B Je ein Liter Lösung
Harnstoff (1,0 g) Hefe Extrakt (0,16 g) KH2PO4 (1,52 g) Na2HPO4 (4,0 g) MgSO4∙7H2O (0,52 g) CaCl2 (0,02 g) Glucose (40 g) Lösung B Je ein Liter Lösung ZnSO4∙7H2O (0,13 g) FeSO4∙7H2O (0,02 g) (NH4)6Mo7O24. 4H2O (0,06 g) H3BO3 (0,06 g) Evreux meeting

3 1.Befüllen des Fermenters
1.1 Lösung A 1.2 Lösung B 1.3 2 mL der Bacillus subtilis Kultur 200 mL 20 µL Evreux meeting

4 2. Vorbereiten des Fermenters
2.1 Bauen Sie Ihr Heiz- und Temperatur-Kontrollsystem in den Fermenter ein. Evreux meeting

5 2.2 Aufbau des Wasserbades Rotationsgeschwindigkeit
(auf das Minimum eingestellt ) Rührwerk Thermostat: Heizung an bei 36°C Heizung aus bei 38°C Rührer Rührer in den Fermenter einbauen Evreux meeting

6 2.3 Starten Sie den Fermenter für 45 Stunden, bei 37°C und minimaler Rührgeschwindigkeit.
Evreux meeting

7 3. Extraktion von PHB 3.1 Zentrifugation
Entfernen Sie den Fermenter aus dem Wasserbad. Lassen Sie die Feststoffe im Fermenter 15 Minuten absetzen. Entnehmen Sie 150 mL (15x10mL) des Überstandes mit einer Pipette. (Bewahren Sie den Überstand in einem Becherglas auf) Zentrifugieren Sie den restlichen Fermenterinhalt: Dauer: 15 Minuten Rotation: rpm Evreux meeting

8 3.2 Hypochlorid Behandlung
Dekantieren Sie den Überstand aus dem Zentrifugenröhrchen. Geben Sie zum Pellet im Zentrifugenröhrchen 10 mL Natriumhypochlorid. Inkubieren Sie die Mischung bei 60°C für 45 Minuten. 10 mL Evreux meeting

9 3.3 Waschen mit destilliertem Wasser
Behalten Sie das Pellet (entleeren Sie den Überstand in den Abfallbehälter). Waschen Sie das Pellet mit 5 mL destilliertem Wasser. Zentrifugieren Sie die Mischung: Zeit: 5 Minuten Rotation: rpm 5 mL Evreux meeting

10 Waschen Sie das Pellet mit 5 mL Aceton.
3.4 Waschen mit Aceton Behalten Sie das Pellet (entleeren Sie den Überstand in den Abfallbehälter). Waschen Sie das Pellet mit 5 mL Aceton. Zentrifugieren Sie die Mischung: Zeit: 5 Minuten Rotation: rpm 5 mL Evreux meeting

11 Waschen Sie das Pellet mit 5 mL Methanol.
3.5 Waschen mit Methanol Behalten Sie das Pellet (entleeren Sie den Überstand in den Abfallbehälter). Waschen Sie das Pellet mit 5 mL Methanol. Zentrifugieren Sie die Mischung: Zeit: 5Minuten Rotation: rpm 5 mL Evreux meeting

12 3.6 Chloroform Behandlung
Behalten Sie das Pellet (verwerfen Sie den Überstand). Überführen Sie das Pellet in eine Glas-Petrischale. Geben Sie unter dem Abzug 5 mL Chloroform hinzu. 5 mL Evreux meeting

13 Durchmischen Sie das Gemisch durch eine rotierende Bewegung.
Setzen Sie die Petrischale unter einen Trichter, der an eine Vakuumpumpe angeschlossen ist. Durchmischen Sie das Gemisch durch eine rotierende Bewegung. Evreux meeting

14 4. Gewinnung von PHB Wenn das Chloroform vollständig verdampft ist, können Sie den PHB Plastikfilm vom Boden der Petrischale abziehen. Evreux meeting