Auswertung Plasmidisolierung Restriktionsverdau

Präsentation zum Thema: "Auswertung Plasmidisolierung Restriktionsverdau"—  Präsentation transkript:

1 Auswertung Plasmidisolierung Restriktionsverdau
Achtung: Diese Auswertung ist nur ein Beispiel. Das hier beschriebene Plasmid wird NICHT im Versuch verwendet!

2 Agarosegel Marker HindIII XbaI XbaI ScaI ScaI HindIII
Marker HindIII XbaI XbaI ScaI ScaI HindIII HindIII XbaI ScaI HindIII Ungeschn.Plasmid Methode 1 Ungeschn. Plasmid Methode 2 bp 8.000 bp 6.000 bp 5.000 bp 4.000 bp 3.000 bp 2.500 bp 2.000 bp 1.500 bp 1.000 bp 800 bp 600 bp

3 Eichgerade

4 Fragmentlängen der Plasmid-Restriktion
Ermittlung der resultierenden Fragmentlänge aus der Eichgeraden Gesamtlänge des Plasmids = Summe der einzelnen Fragmentlängen Durchschnittswert ermitteln und mit dem Literaturwert vergleichen: pBlue800 = 3800 bp

5 Erstellen von Restriktionskarten
Ermittlung der relativen Lage der Schnittstellen zueinander auf dem Plasmid Je ein Plasmidmodell pro Spaltungsansatz, welches die jeweiligen Schnittstellen beinhaltet

6 Allgemeine Hinweise Einleitung: Versuchsziel, Restriktionsenzyme
Durchführung: Verweis auf das Skript; außer bei Abweichungen Ergebnisse: Werte angeben: DNA-Konzentration => absolute Ausbeute DNA-Reinheit [A260/ A280] Gelbilder/ Abb. Beschriften (Markerbanden) beschriften Eichgerade erstellen Fragmentlängen bestimmen => Plasmidkarte für jeden Ansatz Plasmidgröße bestimmen

7 Allgemeine Hinweise Diskussion: Erwartungen/ Ergebnisse Verfahren gegenüberstellen Ausbeute Handling/ Gefahren, etc. Fehlerdiskussion