Zellkulturtechnik.

Präsentation zum Thema: "Zellkulturtechnik."—  Präsentation transkript:

1 Zellkulturtechnik

2 Themengliederung Allgemeines Zellkuturtypen
Voraussetzungen für Zellkulturen

3 Zellkulturtechnik Vorteile: In vivo - Untersuchung schwierig
Definierte Bedingungen

4 Komplexität - Manipulierbarkeit

5 Zellkulturtypen Primärkultur Zelllinien Organotypische Schnittkulturen

6 Primärkulturen Zellen direkt aus dem Lebewesen entnommen
Klassisches Beispiel: Hippocampus des Rattenembryos -> Pyramidenzellen

7 Entwicklung der Pyramidenzellen
Zellen beim Ausplattieren rund Bilden dynamische Membran – ausstülpungen = Lamellipodien

8 Entwicklung der Pyramidenzellen
Bildung von nicht unterscheidbaren Zellausläufer = Neuriten

9 Entwicklung der Pyramidenzellen
Ein Zellausläufer entwickelt sich schneller Axonale Morphologie Entwicklung von Polarität

10 Entwicklung der Pyramidenzellen

11 Tau Protein Während Entwicklung von Polarität im Axon angereichert
Mikrotubuli assoziiert Tauopathien (z.B. Morbus Alzheimer)‏

12 Zelllinien können permanent in Kultur gehalten und vermehrt werden
Unbegrenzt Teilungsfähig z.B. aus Tumor gewonnen

13 Zelllinien: PC12 Oft verwendete Linie
Begrenzte Fähigkeit zur Differenzierung Durch NGF -> Neuriten Bildung

14 Zelllinien: NT2-N/hNT NT2 Vorläuferzellen
Nach Vit A – Säure Behandlung: Fähigkeit zur Differenzierung

15 Organotypische Schnittkulturen
Lokale Gewebearchitektur bleibt erhalten Vorteil: Vergleichbarkeit zum in vivo-Zustand Nachteil: „Verletzungstrauma“

16 Auswahl des Gewebes Welche Tierspezies? Welcher Zelltyp? Maus, Ratte
Entwicklungszeitpunkt -> unterschiedlich je nach Hirnregion - Differenzierungsstadium <-> Regeneration

17 Kultivierungsbedingungen
Nährmedium kann Zelltyp selektieren DMEM Kollagen/Polylysin als Haftoberfläche

18 Indirekte Immunperoxidase Technik

19 Avidin-Biotin-Technik

20 Quellen „Methoden der Hirnforschung“, Kischka, Wallesch, Wolf – Spektrum Verlag „Zell- und Gewebekultur“, Lindl – Spektrum Verlag

21 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit !
Zellkulturtechnik Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit !