Fabian Kirchhoff, 10.10.2009 1 Entwicklung einer on-line- SPE-Methode zur Messung der Urin-Methylmalonsäure Fabian Kirchhoff.

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1 Fabian Kirchhoff, 10.10.2009 1 Entwicklung einer on-line- SPE-Methode zur Messung der Urin-Methylmalonsäure Fabian Kirchhoff

2 Fabian Kirchhoff, 10.10.20092 allgemeines Vitamin B 12 -Mangel: Analytik - Vitamin B 12 -Serumspiegel - MMA/ Homocystein Goldstandard: MMA/ Kreatinin Ratio (Spontanurin)

3 Fabian Kirchhoff, 10.10.20093 MMA - Messung ESI- geringe Retention => Quantitativ? aber: keine Derivatisierung nötig! ESI+ Phasenüberführung/ Derivatisierung Zeit Online SPE Immer: Basislinientrennung der isobaren Bernsteinsäure

4 Fabian Kirchhoff, 10.10.20094 Derivatisierung: SA / MMA - dibutylester  

5 Fabian Kirchhoff, 10.10.20095 On-line SPE Vorteile:  zusätzlicher Aufreiningungsschritt  Lebensdauer der chromatographischen Säule (pH – HCl/n-BuOH)  Ion suppression  Ökonomisch/ Kosten  ZEIT

6 Fabian Kirchhoff, 10.10.20096 Massenübergänge

7 Fabian Kirchhoff, 10.10.20097 Fließmittel MeOH/ H 2 O (Ziel: AcN sparen)  sehr gute (bessere!) Intensität beim tunen, aber keine Basislinientrennung => Säulenoptimierung/ Gradient/ doch AcN/ H 2 O

8 Fabian Kirchhoff, 10.10.20098 Optimum

9 Fabian Kirchhoff, 10.10.20099 Optimum Acetonitril/ 10mM NH 4 OOC (60/40 v/v) Alternative: UPLC, MeOH/H 2 O – Gradient C18 Säule – embedded polar group

10 Fabian Kirchhoff, 10.10.200910 Sonstige Probleme Stabilität FM Gemisch (60/40 – knapp!)

11 Fabian Kirchhoff, 10.10.200911 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit