Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der DGKL 24. September in Tutzing Steffen Liedtke, Dionex GmbH, Idstein.

Präsentation zum Thema: "Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der DGKL 24. September in Tutzing Steffen Liedtke, Dionex GmbH, Idstein."—  Präsentation transkript:

1 Ein großer Schritt in die Welt der kleinen Dimensionen Nano LC heute LC-MS/MS-Treffen der DGKL 24. September in Tutzing Steffen Liedtke, Dionex GmbH, Idstein

2 Die Herausforderung

3 Das Problem

4 S/N = 3800200 nL/min S/N = 11.0 mL/min SensitivityFlow rateColumn i.d. [4.6 mm] [75 µm] Die Lösung

5 2. Probenvorbereitung: Gemäß GLP für HPLC! Zentrifugieren Online Clean-Up 3. Totvolumina: Sind tatsächlich tödlich! 4. MS-Interfacing: Hardware (+), Software (+/-). Die Praxis 1.Lösungsmittel und Additive: Nur beste Qualitäten nutzen! 5. Stoff- & Volumenüberladung: Vermeiden durch “Preconcentration”! Peak-Verbreiterung Schlechte Trennleistung 6. Säulenauswahl: (Fast) alles geht! MS-Kompatibilität Robustheit & Geschwindigkeit 7. Automatisierung: MDLC!

6 Extra-Column Dispersion

7 Void Volume Due to Bad Connections

8 Separation of a 500 fmol tryptic digest of -galactosidase with preconcentration. The data shown are for a system without (upper trace) and with (lower trace) void volume and are a comparison of MS base peak chromatograms (BPC). Because of the void volume and mixing effects, the signals for hydrophilic peptides are lost. From Mitulovic et al., 2003. Pitfalls of Preconcentration Techniques

9 Special Issue Paper An improved method for tracking and reducing the void volume in nano HPLC–MS with micro trapping columns Goran Mitulović, Marek Smoluch, Jean-Pierre Chervet, Ines Steinmacher, Andreas Kungl, Karl Mechtler Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2003 Die “Bibel”

10 Preconcentration Column Set-up Trap Column 300 µm i.d. x 5 mm Capillary Column 75 µm i.d. x 150 mm Gradient 200 nL/min

11 Eksigent Waters Dionex Agilent State-of-the-Art Nano LC Systems

12 Advanced Column Switching Technologies Automated Offline 2D-LC

13 “It is all a matter of mass transfer and column permeability” (C. Huber) PS-DVB (Silica) particlesPS-DVB monolith

14 Danke für Ihre Aufmerksamkeit!