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Blutentnahme Serumpräparation Isolierung von Antikörpern
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Herzpunktion
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Herzpunktion
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Herzpunktion
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Venenpunktion
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Gewinnung und Lagerung von Serum
Blut in Zentrifugenröhrchen sammeln Gerinnung bei 37°C (1 Std.) und 4°C über Nacht Zentrifugieren und Überstand sammeln Lagerung von IgG: Serum sterilfiltrieren, aliquotieren, gefriertrocknen und bei 4°C oder -20°C lagern; oder Serum in aliquoten Portionen bei -20°C oder -70°C frieren; oder Serum nach Zugabe von Azid bei 4°C lagern Lagerung von IgM Serum sterilfiltrieren, Zugabe von Azid und bei 4°C lagern Isolierte Ig-s sind empfindlicher als Gesamtserum
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Isolierung von AK: Aussalzen
Proteinfällung durch Zugabe von Neutralsalzen, z.B. : (NH4)2SO4; NaCl; ZnSO4 Fällung von Total-Ig: 45% (NH4)2SO4 ph, 7,0 bei 4°C Trennung von IgM, IgG und IgA durch fraktionierte Fällung mit steigenden Mengen an ZnSO4 Entfernung der Salze durch Dialyse Elektrodialyse Gelfiltration mit Molekularsieb Ultrafiltration
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Isolierung von AK: Ionenaustauschchromatographie
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Isolierung von AK: Molekularsiebchromatographie
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Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung
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Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung
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Isolierung von AK: Ultrazentrifugation
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Isolierung von AK: Affinitätschromatographie
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Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie
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Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie
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Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie
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Affinitätsreinigung von Antikörpern mit Anti-Immunglobulinen
Anti-Immunglobuline (z. B. Schaf) gegen Fc-Teil eines Antikörpers (z. B. Kaninchen) hergestellt Anti-Immunglobuline (Schaf) an Matrix gebunden Antikörper (Kaninchen) nach Regeln der Affinitätschromatographie gereinigt Matrix Kaninchen - Ig Anti - Kaninchen - Ig
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Wechselwirkung AG:AK
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Wechselwirkung AG:AK; Affinität
Affinität hoch Affinität mittel Affinität niedrig
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Wechselwirkung AG:AK; Kreuzreaktion
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