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Blutentnahme Serumpräparation Isolierung von Antikörpern.

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Präsentation zum Thema: "Blutentnahme Serumpräparation Isolierung von Antikörpern."—  Präsentation transkript:

1 Blutentnahme Serumpräparation Isolierung von Antikörpern

2 Herzpunktion

3

4

5 Venenpunktion

6 Gewinnung und Lagerung von Serum Blut in Zentrifugenröhrchen sammeln Gerinnung bei 37°C (1 Std.) und 4°C über Nacht Zentrifugieren und Überstand sammeln Lagerung von IgG: Serum sterilfiltrieren, aliquotieren, gefriertrocknen und bei 4°C oder - 20°C lagern; oder Serum in aliquoten Portionen bei -20°C oder -70°C frieren; oder Serum nach Zugabe von Azid bei 4°C lagern Lagerung von IgM Serum sterilfiltrieren, Zugabe von Azid und bei 4°C lagern Isolierte Ig-s sind empfindlicher als Gesamtserum

7 Proteinfällung durch Zugabe von Neutralsalzen, z.B. : (NH 4 ) 2 SO 4 ; NaCl; ZnSO 4 Fällung von Total-Ig: 45% (NH 4 ) 2 SO 4 ph, 7,0 bei 4°C Trennung von IgM, IgG und IgA durch fraktionierte Fällung mit steigenden Mengen an ZnSO 4 Entfernung der Salze durch Dialyse Elektrodialyse Gelfiltration mit Molekularsieb Ultrafiltration Isolierung von AK: Aussalzen

8 Isolierung von AK: Ionenaustauschchromatographie

9 Isolierung von AK: Molekularsiebchromatographie

10 Isolierung von AK: Isoelektrische Fokusierung

11

12 Isolierung von AK: Ultrazentrifugation

13 Isolierung von AK: Affinitätschromatographie

14 Isolierung von AK: Protein A/G Chromatographie

15

16

17 Anti-Immunglobuline (z. B. Schaf) gegen Fc-Teil eines Antikörpers (z. B. Kaninchen) hergestellt Anti-Immunglobuline (Schaf) an Matrix gebunden Antikörper (Kaninchen) nach Regeln der Affinitätschromatographie gereinigt Matrix Anti - Kaninchen - Ig Kaninchen - Ig Affinitätsreinigung von Antikörpern mit Anti-Immunglobulinen

18 Wechselwirkung AG:AK

19 AK AG AK AG AK AG Wechselwirkung AG:AK; Affinität Affinität hoch Affinität niedrig Affinität mittel

20 Wechselwirkung AG:AK; Kreuzreaktion


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