Labor-Seminar Juliane Schmidt Und ganz viele Helfer!

Präsentation zum Thema: "Labor-Seminar Juliane Schmidt Und ganz viele Helfer!"—  Präsentation transkript:

1 Labor-Seminar 07.02.2007 Juliane Schmidt Und ganz viele Helfer!
„Evaluierung und Validierung potenzieller molekulargenetischer Tumormarker in Urinproben von Patienten mit Verdacht auf Harnblasenkarzinom“

2 Einführung Harnblasenkarzinom (BCa)
Vierthäufigster Tumor beim Mann weltweit & neunthäufigste Ursache eines tumorbedingten Todes Zystoskopie (invasiv) & Urinzytologie: Standardmethoden zur Diagnose und Überwachung kein idealer BCa-Tumormarker zur nichtinvasiven Diangostik

3 Zielstellung Etablierung standardisierter Methoden zur quantitativen Transkriptmessung in Geweben (TUR-Späne) und Urinproben Targetvalidierung an Gewebeproben (Tu-Tf) Evaluierung verschiedener tumorassoziierter Faktoren (Survivin, XIAP, Ki67) als mögliche diagnostische und prognostische BCa-Marker

4 BCa-assoziierte Gene Survivin & XIAP: “inhibitor of apoptosis proteins” (IAP) Ki67: Proliferationsmarker, essential für Zellzyklus selektiv überexprimiert in vielen Tumorarten inkl. BCa Assoziation zwischen Überexpression und höherem Tumorstadium & Grad sowie mit ungünstiger Prognose ( SVV+Ki67 ) geeignete Marker (Literatur: Gewebe und Urin) und therapeutische Targets für Antitumortherapien (z.B. Antisense- Studie)

5 Material & Methoden 1 prospektive Studie: Februar 2006 – Januar 2007
Einschlusskriterien: Patienten mit Verdacht auf ein BCa (Neudiagnose oder Rezidiv) die sich einer transurethralen Resektion (TUR-BT) unterziehen Ausschlusskriterien: Patienten mit zusätzlichem Prostata-Ca Patienten mit gutartigen Veränderungen ( z.B.Papillom ) Patienten mit nicht-urothelialen Karzinomen (z.B.Adeno-Ca)

6 Material & Methoden 2 Kontrollgruppen: BPH-Patienten
Cystitis-Patienten Gesunde Cystektomiepatienten ( Sammlung läuft noch )

7 Material & Methoden 3 BCa-Patienten: Kontrollen: 1 Urinprobe
prä-operative Urinprobe intra-operatives Gewebe (Tumor & scheinbar normale Blasenmucosa) post-operative Urinprobe (Sammlung ge- stoppt) für jede TUR-BT (prim./sek./tert., aller 4-6 Wo.) gleicher Zyklus auch bei Rezidiven Kontrollen: 1 Urinprobe

8 Behandlungsverlauf eines Blasenkarzinompatienten
Rezidiv Primäre TURBT ca Wochen Rezidiv Sekundäre TURBT Cystektomie ca Wochen Tertiäre TURBT Cystektomie

9 Material & Methoden 4 Sedimentation der Zellen aus dem Urin
Gewebekryoschnitte (Tf = 0%, Tu = %) Isolation von total RNA und cDNA-Synthese quantitative PCR für Survivin, XIAP & Ki67 und das Referenzgen TBP in Urin- & Gewebeproben Korrelation der relative Expressionsniveaus von Survivin, XIAP & Ki76 (interne Normalisierung auf TBP) mit klinisch-pathologischen Aspekten

10 Bca-Patienten (N=106) BT= 89 ( 84% ) NT= 17 ( 16% )
Alter (median) = 70 Jahre (34 – 93) M:F = 63 : 43 (59,4% : 40,6%) Neudiagnose : Rezidiv = 92 : 14 (86,8% : 13,2%) PSA (median; 58 Pat.) = 1,195 (0,16 – 33,91) Tumorstadien: NT= kein Tumor nachweisbar n= pTa n= pT n= >PT n=17 NA n=1 cis: 92 :14 (86,6% : 13,2%) Tumorgrade: NT n=17 LMP (low malignancy potential) n=6 low grade n=17 high grade n=66

11 Kontrollen BPH: n =34 67,5 Jahre (52-85J.) PSA-Median 2,105ng/ml
(0,28-21,58) Cystitis: n = ,5 Jahre (19-76J.) M : F = 1:5 Gesunde: n = Jahre (18-59J.) M : F=7:22

12 Cytologie 36% 92% 75% 78% Vergleich mit unseren Daten folgt
Negativ prädiktiver Wert (npW) Positiv prädiktiver Wert (ppW) Spezifität Sensitivität Vergleich mit unseren Daten folgt

13 Ergebnisse 1 2 Referenzgene getestet: TBP besser als HPRT Urinproben: negative Korrelation zw. Referenzgen- Expression & Erythrozyten / Leukozyten  viele Proben mit Ref.gen unter Nachweisgrenze von 10 Transkriptmolekülen Gewebeproben: weniger Proben mit neg. Referenzgen aufgrund technischer Probleme viele der ersten Proben verworfen oder cDNA nicht mehr ausreichend für vollständige Messung aller Gene

14 Ki67/TBP in ungepaarten Gewebeproben

15 XIAP/TBP in ungepaarten Gewebeproben

16 SVV/TBP in ungepaarten Gewebeproben

17 Ki67/TBP in Urinen von BCa-Patienten und Kontrollen
Gesunde: fehlende Werte Null gesetzt

18 XIAP/TBP in Urinen von BCa-Patienten und Kontrollen

19 SVV/TBP in Urinen von BCa-Patienten und Kontrollen

20 Ki67/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Tumorstadium

21 XIAP/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Tumorstadium

22 SVV/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Tumorstadium

23 Ki67/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Tumorgrad

24 XIAP/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Tumorgrad

25 SVV/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Tumorgrad

26 Schlussfolgerungen Eignung als Tumormarker: Ki67,(SVV)
Abhängigkeit vom Tumorstadium: Ki67,SVV Abhängigkeit vom Tumorgrad: Ki67,(SVV) XIAP ungeeignet: Expression im Prostata- gewebe => bei BPH Expression in Leukozyten => bei Cystitis

27 Ausblick 1 gezielte Nachbeobachtung von Patienten ohne histologischen Tumornachweis (NT) Abfall der Tumormarker nach der primären TUR-BT? Statistische Signifikanz: möglich durch Kombination der Tumormarker ? (Verweis auf Prostata-Krebs-Studie) Ausweitung der Tumorgene ( z.B. hTERT,CK20 ) Vergleich mit Urinzytologie (Cutt-offs?)

28 Ausblick 2 Geschlechtsspezifischer Test ( Probleme durch Einfluss von BPH ) Korrelation Tumormarker im Urin und korrespondierenden Gewebe Ausschlusskriterium Harnwegsinfekt:  Bakterienzahl oder positive Urinkultur? Sammlung BPH- ,Cystitis-und Cystektomie- Patienten Abschätzung der Rezidivhäufigkeit?